9050-76-4，Ribonuclease H (RNase H) 核糖核酸酶H的实验操作注意事项

试剂中英文名称：Ribonuclease H (RNase H) 核糖核酸酶H

CAS：9050-76-4

外观：白色粉末

纯度：95%

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，低温运输。

产地：西安强化生物

一、背景定义：

定义：RNase H 是一种核糖核酸内切酶，特异性水解 RNA-DNA杂合双链中的RNA链，生成带有5'-磷酸和3'-羟基末端的寡核糖核苷酸，且不作用于单链/双链DNA或RNA。

酶活性机制：需至少4个连续RNA-DNA碱基对才能发挥活性，切割RNA磷酸二酯键。

来源：主要从大肠杆菌（E. coli）重组表达纯化，如MRE-600或H560 pol A1菌株。

合适条件：

pH：7.7-8.3。

温度：37℃为反应温度，65℃加热10-20分钟可完全失活。

激活因子：Mg²⁺或Mn²⁺为必需辅因子。

使用优势：

高特异性：仅降解RNA-DNA杂交链中的RNA，不损伤DNA或单/双链RNA。

操作简便：

标准反应体系：37℃孵育30-60分钟，65℃加热灭活。

配套缓冲液优化活性（含Tris-HCl、KCl、MgCl₂、DTT）。

技术创新支持：

CRISPR-Cas12a检测法：60分钟内快速测定RNase H活性，加速抗病毒药物筛选。

侧向流技术：高灵敏度（0.07单位）、15分钟完成检测，无需放射性标记。

二、实验操作注意事项

反应体系配制：

使用前需充分混匀缓冲液，避免产生泡沫。

反应温度通常为 37℃，时间30-60分钟。

终止反应：

建议通过65℃加热20分钟终止反应。

酶活性定义：

不同产品活性单位定义可能差异：

多数定义为 37℃下20分钟内水解1 nmol酸性可溶性产物。

部分使用荧光标记底物（如50bp RNA-DNA杂交物）。

物理敏感性：

酶对物理变性敏感，需轻柔混匀（如颠倒），禁止剧烈振荡。

使用过程中置于冰浴上，用后立即放回-20℃。

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用于科研相关领域，不能用于人体实验！

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