「干货分享」NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell的作用机制大公开！

标题：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

【🍬参数信息】

英文名称：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell

中文名称：NovaBlue(DE3)大肠杆菌化学感受态细胞

运输：低温运输

规格：10×50μl，50×50μl

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

菌株描述

NovaBlue(DE3)菌株来源于K12菌株，具有极高的转化效率，能同时用于普通质粒的构建以及蛋白的原核表达。

NovaBlue(DE3)菌株具四环素抗性，recA和endA的突变有利于插入DNA的稳定和高纯质粒DNA的提取。

lacZΔM15的存在使其能用于蓝白斑筛选。

NovaBlue(DE3)菌株含DE3区，说明其染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体，适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

描述

本品是大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。

经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。

且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

【作用机制】

1. DNA转化机制（化学感受态）

原理：通过化学试剂处理细胞，使其细胞膜通透性增加，允许外源DNA进入。

操作步骤：

冰浴融化感受态细胞，加入目标DNA（体积≤1/10细胞悬液）。

冰浴30分钟：促进DNA吸附于细胞表面。

42℃热激45-90秒：短暂升温形成膜通道，使DNA进入细胞。

冰浴2-3分钟：封闭膜通道。

加入复苏培养基（如LB/SOC） ：37℃振荡培养45-60分钟，使抗性基因表达。

涂布含抗生素平板：筛选转化子。

2. 蛋白表达机制（依赖DE3区）

T7 RNA聚合酶表达：

DE3区整合的 lacUV5 启动子驱动 T7 RNA聚合酶组成型表达。

当目标基因克隆至 T7启动子载体（如pET、pGEX、pMAL系列）时，T7 RNA聚合酶可特异性激活其转录。

诱导表达：

添加 IPTG（0.1-2 mM）解除 lacIq 阻遏蛋白对 lacUV5 的抑制，诱导T7 RNA聚合酶及目标蛋白表达。

需优化IPTG浓度、温度（通常37℃）和时间（通常3-6小时）。

3. 克隆筛选机制

蓝白斑筛选：

lacZΔM15 突变导致β-半乳糖苷酶失活，但与载体（如pUC系列）的α肽互补后可恢复活性。

在含 X-gal 和 IPTG 的平板上，含空载体的菌落呈蓝色，重组质粒（插入片段破坏α肽）菌落呈白色。

抗生素筛选：四环素抗性用于转化子初筛。

【应用领域】

（1）质粒构建与克隆

高转化效率适合连接产物转化、质粒扩增及文库构建。

支持蓝白斑筛选（需使用含lacZα的载体，如pUC系列）。

（2）蛋白原核表达

核心应用：专为T7启动子载体设计（如pET、pGEX、pMAL系列），可诱导表达目标蛋白。

需配合IPTG诱导（浓度0.1–2 mM），并优化温度/时间参数。

（3）特殊场景适配性

适用于需要高纯度质粒的实验（如测序、转染）。

【相关试剂】

Cy3 生物素偶联物

iFluor 680 Phalloidin

iFluor647 Phalloidin

iFluor594 Phalloidin

SYTO 9 (20× in DMSO) PCR

Decylubiquinone (mPTP inhibitor)

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司