9025-65-4，Benzonase Nuclease具体操作步骤大公开！

【🍬参数信息】

英文名称：Benzonase Nuclease

中文名称：全能核酸酶（带Strep标签）

CAS NO：9025-65-4

酶活性值：≥250 U/μL

比活性值：≥1×106U/mg蛋白

蛋白酶：未检出

合适pH：8.0（工作范围pH6-10）

合适温度：37℃（工作范围0-42℃）

活性单位定义：在37℃，pH8.0反应条件，30min内使△A260值降低1.0所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

Benzonase，一种源于的非特异性核酸内切酶，由两个完全一样的亚基构成，每个亚基大约30kDa，含有245个氨基酸和两个必需的二硫键。

可以切割和降解各种形式的DNA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效。

对核酸碱基序列无特异性要求，可在链内任意核苷酸间进行切割，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造的原核表达纯化所得，携带Strep-tag II标签（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys），核酸消化后可用牢固结合Strep-tag II的磁珠或树脂来去除。

Strep-tag II标签很小，对酶的结合和活性基本无影响。

本品能有效降低蛋白样本粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，无蛋白酶活性残留，核酸酶活性高达1×106 U/mg蛋白。

本品未经特殊的内毒素去除处理，适用于常规的科研应用，包括常规蛋白样本提取时核酸污染的去除，2D凝胶电泳蛋白样本的制备，WB，WB-IP等。

【使用方法】

具体样本操作步骤

（一）细胞样本（贴壁/悬浮细胞）

裂解液体积：每100万细胞使用100 μL裂解液（如RIPA）。

酶添加量：

贴壁细胞：100 μL裂解液 + 1-5 μL 全能核酸酶。

悬浮细胞：同贴壁细胞或按1 mL裂解液 + 1-2 μL 酶。

步骤：

贴壁细胞：弃培养基→PBS洗涤→加含酶的裂解液。

悬浮细胞：离心收集沉淀→重悬于含酶的裂解液。

室温孵育 15-30分钟（冰上可延长至30分钟）。

12,000-14,000 ×g 离心 10-30分钟，取上清用于下游实验。

（二）组织样本

组织量：30-100 mg。

裂解液体积：100-200 μL（如RIPA）。

酶添加量：每100-200 μL裂解液加 0.5-10 μL 酶（多数推荐1-5 μL）。

步骤：

充分研磨组织。

加入裂解液和酶，混匀。

室温或冰上孵育 30分钟 。

12,000 ×g 离心 10-30分钟，取上清。

（三）细菌样本（如大肠杆菌）

菌体处理：离心收集菌体→重悬于裂解液（体积比为1:10）。

酶添加量：每1 mL裂解液加 1-5 μL 酶。

步骤：

裂解菌体（机械/化学法）。

加酶后室温孵育 30分钟。

12,000 rpm 离心 10-30分钟，取上清。

【相关试剂】

FITC-Con A FITC

Cy7 tetrazine Cy7四嗪

Cy5.5 tetrazine Cy5.5四嗪

Texas Red TCO 单一异构体

Fluo-4 Pentapotassium Salt

CopyCutter Induction Solution 诱导液

Stigmasterol Glucoside 豆甾醇葡萄糖苷

pCAMBIA1300 Plant Expression Vector

DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

MSU440 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

EPI400 Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司