「使用前必看！」MSU440 Electrocompetent Cell的使用方法和注意事项

【🍬参数信息】

英文名称：MSU440 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

中文名称：MSU440 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

形态：经特殊工艺制备成电转感受态细胞，适用于大质粒的转化。

规格：通常为 50μl/支，包装形式包括10×50μl或50×50μl。

运输：低温运输。

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

MSU440 Electrocompetent Cell 是一种应用于农杆菌电转化的感受态细胞，属于发根农杆菌菌株。

其核心特征包括：

菌株特性：

革兰氏阴性土壤细菌，具有广泛的宿主范围（可感染大多数双子叶植物、部分单子叶植物及裸子植物，如玉米、茶树、烟草等）。

天然携带 农杆碱型Ri质粒（agropine-type Ri plasmid），赋予其 链霉素抗性（Str）。

基因型明确为 Agrobacterium rhizogenes (Str) MSU440 Ri 。

【使用方法】

（1）将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

（2）取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

（3）往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

（4）启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V，将电击杯从冰中取出，吸水纸吸干外表面水分，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中。

（5）加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。

（6）6,000rpm离心1min，留取100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

【注意事项】

（1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

（2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

（3）加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

（4）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

（5）电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

（6）平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。

（7）MSU440具链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

（8）为了保证转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基。

（9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【相关试剂】

FITC-Con A FITC

Cy7 tetrazine Cy7四嗪

Cy5.5 tetrazine Cy5.5四嗪

Texas Red TCO 单一异构体

Cy3B azide Cy3B 叠氮化物

DBCO-Cy5 荧光染料DBCO-Cy5

Calcium Ionophore A23187钙离子载体

Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸）

Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸）

ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging

Cyanine 7 amine [equivalent to Cy7 amine] Cy7 胺

ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司