快速熟悉DyLight 488 Labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)的通用实验步骤

【🍬参数信息】

英文名称：DyLight 488 Labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)

中文名称：DyLight 488标记的番茄凝集素（LEL, TL）

应用：糖生物学，免疫荧光

荧光颜色：绿色

糖特异性：[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

DyLight 488标记的番茄凝集素是一种荧光标记的糖蛋白探针，来源于番茄（Lycopersicon esculentum）。

其核心成分为番茄凝集素（LEL或TL），通过共价结合荧光染料DyLight 488形成复合物。

主要特性包括：

结构：单亚基糖蛋白，含约50%的阿拉伯糖和半乳糖，在溶液中可能形成多聚体。

糖结合特异性：无血型特异性，但可高亲和力结合 N-乙酰-β-D-葡糖胺寡聚体，抑制/洗脱糖为壳多糖水解物。

荧光特性：激发波长493 nm，发射波长518 nm，呈绿色荧光。

【实验步骤（通用流程）】

（一）溶液配制

工作浓度：5–20 µg/mL（推荐用PBS或含1% BSA的缓冲液稀释）。

储存液：产品为1 mg/mL浓缩液，含10 mM HEPES、0.15 M NaCl、0.08% NaN3、0.1 mM CaCl2（pH 7.5），需避光保存于2–8°C（不可冷冻）。

（二）样本处理

组织切片染色：

固定组织切片（如4%多聚甲醛），透化（可选）。

滴加稀释后的凝集素溶液，室温避光孵育30–60分钟。

PBS冲洗3次，每次5分钟，去除未结合凝集素。

血管灌注法：

麻醉动物，经心内或尾静脉注射稀释的凝集素溶液（如0.1 mg/mL）。

灌注后快速取材，制备冰冻切片观察。

细胞染色（如原始生殖细胞）：

收集细胞（如血液或组织解离液），用PBS洗涤。

加入稀释凝集素，冰上避光孵育15分钟，PBS冲洗后直接观察或分选。

（三）荧光检测

激发/发射波长：493 nm激发，518 nm发射（绿色荧光），使用FITC滤光片观察 。

显微镜设置：荧光显微镜或共聚焦显微镜，避免长时间光照以防淬灭。

（四）对照与优化

阴性对照：加入抑制糖（如壳多糖水解物，Chitin Hydrolysate）预处理样本，阻断凝集素结合。

浓度优化：实验建议梯度测试（5、10、20 µg/mL）以确定浓度 。

【相关试剂】

MPP+ iodide

NAD氧化型辅酶I

Ionomycin，Free Base

LysoTracker Deep Red

AGL1 Electrocompetent cell

SYBR Green I Nucleic Acid Stain

AGL1 Chemically Competent Cell

GV3101 Chemically Competent Cell

EHA101 Chemically Competent Cell

EHA105 Chemically Competent Cell

Calcium Ionophore A23187钙离子载体

Acti-stain670phalloidin红色荧光标记鬼笔环肽

ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司