快速浏览DyLight 649 labeled Lycopersicon Esculentum的实验步骤（综合操作流程）

【🍬参数信息】

英文名称：DyLight 649 labeled Lycopersicon Esculentum

中文名称： DyLight 649标记的番茄凝集素

应用：糖生物学，免疫荧光

荧光颜色：红色

糖特异性：[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

DyLight 649标记的番茄凝集素是一种稳定的单亚基糖蛋白，由番茄提取的凝集素（LEL/TL）与远红光荧光染料 DyLight 649 共价偶联而成。

其糖类组分含约 85%半乳糖，在溶液中可能形成多聚体。

荧光特性：激发波长 655 nm，发射波长 670 nm，属于远红光范围，适用于双标实验。

特异性结合靶点

糖结合特异性：主要识别 [GlcNAc] 1,3-N-乙酰葡萄糖胺。

可结合 血型糖蛋白和糖蛋白，但对血型无特异性。

【实验步骤（综合操作流程）】

（一）试剂准备

浓度：推荐工作浓度为 5–20 µg/mL（需用适当缓冲液稀释）。

沉淀处理：若长期储存（2–8°C）后出现沉淀，需在 37°C 加热溶解后再使用。

储存条件：避光保存于 2–8°C，稳定期约6个月。

（二）血管灌注法（活体标记）

步骤：

麻醉动物（如异氟烷），暴露颈动脉。

单次注射 200 µL DyLight 649-LEL 溶液（浓度按需调整）。

让凝集素在血管内循环 15分钟。

用生理盐水冲洗血管，清除未结合凝集素。

取出目标组织（如脑、肿瘤），固定于 2–4% 多聚甲醛（PFA）。

（三）组织切片染色（离体标记）

步骤：

制备新鲜或固定组织切片（厚度依需求）。

将稀释后的DyLight 649-LEL（5–20 µg/mL）滴加于切片，覆盖组织。

孵育条件：

短时孵育：室温避光孵育30分钟至1小时。

深度标记（厚样本） ：避光孵育 5天，中途翻转样本确保渗透均匀。

洗涤：用 0.2% PBST（含Tween-20的PBS） 洗涤3次，每次1小时，去除未结合凝集素。

固定增强：对厚组织建议用 4% PFA后固定24小时，提高标记稳定性。

（四）多色标记（共染色）

顺序操作：

先完成LEL染色并洗涤。

进行其他标记物染色（如SSEA-1、DDX4抗体）：

冰上避光孵育一抗（1:100稀释）1小时。

洗涤后加荧光二抗（如Alexa Fluor 568，1:200稀释）孵育30分钟。

最终封片观察（建议用抗淬灭封片剂）。

【相关试剂】

NAD氧化型辅酶I

MPP+ iodide

3-Estradiol β-峨二醇

SYBR Green I Nucleic Acid Stain

EPI400 Electrocompetent cell

DH10B Electrocompetent cell

TOP10 Electrocompetent cell

EHA105 Chemically Competent Cell

LBA4404 Chemically Competent Cell

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Celltracker CM-Dil活细胞示踪剂CM-Dil （红色）

Acti-stain555phalloidin橙红色荧光标记鬼笔环肽

Acti-stain670phalloidin红色荧光标记鬼笔环肽

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司