11006-33-0，Zeocin的 操作步骤大公开！「实验室干货！」

标题：Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素（100 mg/ml）

【🍬参数信息】

英文名称：Zeocin (100mg/ml)

中文名称：博莱霉素（100 mg/ml）

CAS NO：11006-33-0

化学式：C55H83N19O21S2Cu

分子量：1137.41 g/mol

状态：蓝色溶液

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

Zeocin是一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。

铜离子的存在使得溶液为蓝色，此铜螯合的形式为无活性。

当抗生素进入细胞后，二价铜离子（Cu2+）被还原为一价铜离子（Cu+），并被细胞内的巯基化合物去除。

铜离子被去除后，Zeocin被活化，嵌入DNA使其断裂，终导致细胞死亡。

来自Streptoalloteichus hindustanus的Shble基因赋予Zeocin抗性，该基因编码一种13,665Da大小的蛋白，以化学计量方式结合Zeocin，抑制其DNA双链切割活性。

因此，能表达此蛋白的真核和原核宿主细胞被赋予Zeocin抗性。

本品为溶于去离子水的无菌溶液，浓度为100mg/ml，细胞培养级别。

【操作步骤（以哺乳动物细胞为例）】

（一）细胞对Zeocin敏感性的确定（杀灭曲线建立）

1）重新铺板或者将满盘细胞重新分盘，使得细胞密度约25%，按照8个平板/组准备，培养24h，去除旧培养基。

2）加入含不同浓度Zeocin的筛选培养基，Zeocin浓度可设置为0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml，每个浓度做3个平行；也可根据自身实验体系，设置不同的浓度梯度。

3）每3-4天更换新鲜的筛选培养基，并观察存活细胞的比例。选择在合适时间（1-2周内）杀死大多数细胞的浓度为合适工作浓度。

（二）筛选稳定转染细胞系

1）转染细胞，用100mm培养皿进行培养。以未转染的细胞作为阴性对照。

2）转染后，用预热的1X PBS洗涤一次，加入新鲜培养基。

3）转染48-72h后，用含有最佳浓度Zeocin（由灭杀曲线确定）的新鲜培养基筛选细胞。为了更好的鉴定和筛选细胞集落，建议将细胞按比例稀释成一系列浓度。

4）每3-4天更换新鲜的选择培养基，直到出现细胞集落。

5）挑选并转移克隆到96或48孔板中。在进行更大孔径培养板或培养皿上扩大培养之前，确保培养细胞密度近100%。

（三）稳定转染细胞系的维持培养

可采取以下方式维持培养稳定转染细胞：

1）使用含相同剂量Zeocin的筛选培养基来维持培养；

2）降低Zeocin剂量为原来的一半进行维持培养；

3）使用正好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Zeocin剂量来维持培养【根据杀灭曲线来判断】。

【相关试剂】

DAF-FM DA

Brassinolide

ICG-TFP酯

5-FAM 炔烃

6-TAMRA 炔烃

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Cy5.5 tetrazine Cy5.5四嗪

PEI 25K Transfection Reagent

PEI 40K Transfection Reagent

Lipo2000 Transfection Reagent

Polyethylenimine Linear,MW 25000

Polyethylenimine Linear,MW 40000

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

High-pure Laminin from Mouse EHS sarcoma

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司