Calcein Red, AM 钙黄绿素红，具体染色步骤

试剂简介

Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色）是用于标记和检测活细胞细胞功能的荧光探针之一。Calcein Red, AM自身无荧光，具有细胞膜渗透性。

一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素红（Calcein Red），能与胞内钙离子结合，产生强烈的红色荧光（Ex/Em=560/574），用标准的TRITC/Cy3滤片设置检测。

Calcein Red AM对湿度敏感，粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM储存液需要分装避光冻存，且须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein Red AM工作液须现配现用。

试剂信息

同义名：Calcein Red Acetoxymethyl ester钙黄绿素红乙酰甲酯；

分子量：1015.79

纯度：≥95%（HPLC）

Ex/Em：560/574nm

溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

储存条件：-20℃避光干燥

Calcein Red, AM 钙黄绿素红染色步骤

大多数实验中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。

由于不同细胞系的染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Red AM的工作浓度，使用低探针浓度得到的荧光结果为筛选原则。

（1）取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

（2）对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

（3）去上清，用缓冲液清洗细胞2~3次，充分去除残留的酯酶活性。

（4）用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。

（5）用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

（6）用含合适滤光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的仪器进行检测。

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