抗体特异性选择的考量

1. 蛋白特异性：

• 对于非全长表达的重组蛋白，需注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。

• 内源性蛋白应清楚其剪切与修饰方式，特殊表型的蛋白需进行序列比对，并结合抗体免疫原序列查看交叉反应情况。

• 磷酸化蛋白检测需确定具体位点，不同位点的磷酸化可能意味着不同机制，不能一概而论。

2. 种属特异性：

• 商品化抗体多以人源蛋白序列为模板，根据蛋白同源性与其他种属可能发生交叉反应，应参照说明书注明的可反应种属信息。

• 对于稀有种属抗体，可通过蛋白序列比对选择同源序列免疫的抗体，但这种情况下生产商一般不受理质量申诉，若能申请到免费抗体样品则有利于抗体选择。

3. 实验方法特异性：

• 目前使用抗体的实验方法众多，不同实验方法对蛋白样品的处理方式不同，蛋白含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求也不同。

4. 标记物的特异性：

• 一般实验操作的实验方法如WB、IHC等，通过二抗类试剂标记达到结果呈现目的，而基于仪器分析的实验如流式实验，可能会使用直接标记的一抗，需了解仪器能检测的荧光范围，根据不同参数要求选择对应标记物。在免疫荧光双标实验中，需选配不同的荧光标记物。

原创作者：上海卡凯希生物科技有限公司