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cfDNA丰度低、稳定性差？凡知医学磁珠法提取助力检测
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目前，cfDNA作为液体活检的主要检测对象，已被广泛应用于肿瘤个性化治疗、产前诊断、自身免疫性疾病检测以及器官移植的研究中。由于cfDNA在血液中的浓度极低、片段短、降解快，常规核酸提取方法的效率较低，具有一定的技术难度。因此，提取高质量的cfDNA样本是获取结果准确性的重要前提。
血浆中游离DNA的含量通常较少，约占总DNA的一小部分。因此，在提取过程中需要使用敏感的技术和方法来获取足够的DNA量。
cfDN段长度较短，通常在160-180bp左右，且呈现出明显的片段化特征。这些短片段在提取过程中容易受到物理和化学因素的影响而断裂或者降解。
血浆中有丰富的蛋白、盐类等杂质，加上提取试剂中也有很多化学成分，导致提取的cfDNA纯度不高，又很大可能影响下游实验。
如果采血后不及时分离，血细胞可能破裂，导致基因组DNA污染cfDNA，影响下游cfDNA检测。
随着专门用于cfDNA保存的采血管在临床上的大量使用，采血管中保存液成分也会干扰cfDNA的提取。
cfDNA核酸提取方法对比
能否获得高质量的cfDNA直接关系到下游检测试验的成败。目前离心柱法和磁珠法是两种常见的核酸提取方法，各有长短，详细对比如下：
方法 | 离心柱法 | 磁珠法 |
原理 | 使用特殊硅基材料高盐酸性缓冲液中特异性吸附核酸，去除杂质，低盐碱性缓冲液中洗脱核酸 | 吸附核酸后的复合磁性微球，在外加磁场作用下从溶液中快速分离，从而达到核酸纯化的作用 |
劣势 | 耗费样品多，需反复离心，不便高通量无法应对突发疫情基因诊断等 | 部分自动化仪器程序封闭 |
优势 | 操作难度低，可处理样本类型多，纯度较高 | 安全无毒，处理简单，提取质量高，适用高通量样品处理和自动化 |
表1：cfDNA核酸提取方法对比
正常情况下cfDNA在体液中的丰度低，有效获取血液中微量的cfDNA是目前cfDNA分析的主要障碍。目前，磁珠法是应用最广泛的cfDNA提取方法，其特异性吸附属性，可针对血清、血浆样本中短片段游离DNA进行定向富集，具有纯度高、回收率高、自动化程度高的优势，可适配自动化提取仪进行自动化提取、提取产量高等特点受到大家的喜爱。
血浆游离DNA提取试剂盒（磁珠法）
货号：FG1102
规格：48次/盒(4mL血浆)、96次/盒(2mL血浆)
本产品采用自主研发的磁珠纯化技术和独特的缓冲液系统，针对血清、血浆样本中短片段游离DNA富集定向优化，旨在为用户提供安全、便捷，高灵敏、高质量的核酸提取方法。
起始量灵活：支持从1mL到10mL样本中提取cfDNA。 产物纯度高：脂类、盐类、糖类、蛋白质等杂质残留较少，纯度高。 过程安全：不涉及有毒的酚、、β-巯基乙醇等有机溶剂。 应用多元化：既可支持手动提取，又可高效地与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率。 适用样本广：可适用于EDTA管收集的样本，也适用于各类cfDNA专用采血管收集的样本。
对cfDNA样本的质控主要是评估提取得到的cfDNA的质量、浓度及纯度，有无基因组DNA的污染以及cfDNA样本的单核小体、双核小体和三核小体的分布等。使用cfDNA样本做NGS基因检测时，需要对多个环节进行质控以确保检测结果的可靠性。
凡知采用了控制变量法，针对1mL人血浆，分别选用凡知血浆游离DNA提取试剂盒（磁珠法）和竞品在洗脱体积30μL的条件下，结果显示：凡知提取cfDNA浓度高于竞品，并且在多次重复对比实验中，显示凡知提取cfDNA浓度均高于竞品。
凡知与竞品cfDNA提取总量对比
4200质控（B1-F1竞品、G1-C2凡知）
凡知与竞品测序结果展示
上述结果表明，测序结果表明，目标区域捕获效率、去重后深度等指标，凡知试剂产品性能优于竞品。
凡知与竞品甲基化检测结果展示
血浆游离DNA提取试剂盒（磁珠法）支持从1mL到10mL样本中提取cfDNA，实验操作简便，既可支持手动提取，又可高效地与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率。
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原创作者：北京凡知医学科技有限公司
