基孔肯雅热病毒IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

基孔肯雅热病毒IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

说明书

作者编辑：深圳市恒昊生物科技有限公司

报道详情：I73--1806--9l87

【产品名称】

通用名：基孔肯雅热病毒IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法)

【包装规格】96人份/盒

【预期用途】

该产品用于定性检测人血清或血浆中存在基孔肯雅热病毒IgM抗体，仅供科学研究使用，严禁用临床诊断使用。

【检验原理】

试剂盒微孔板包被基孔肯雅热病毒抗原，在与稀释的患者血清的次孵育期间，任何与抗原发生反应的抗体都会与包被的孔结合。清洗除去样品的其余部分后，添加酶缀合物。如果抗体已与孔结合，则酶结合物将与这些抗体结合。另一系列洗涤后，添加色原（四甲基联苯胺或TMB）。如果存在酶结合物，过氧化物酶将催化消耗过氧化物的反应，并将色原从透明变为蓝色。添加终止溶液终止反应并将蓝色变为亮黄色。然后可以目视或使ELISA酶标仪读取OD值。生物素系统（biotin-avidinsystem）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。

【主要组成成份】

【贮存条件及有效期】

2-8℃密封保存，避免冻结。有效期12个月

【适用仪器】

各类国产和进口酶标仪均可使用，检测波长450nm

【样本要求】

1、尽量用新鲜标本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周（样本应避光）。避免反复冻融（3次以上）。

2、避免用溶血、混浊或脂血标本。

3、样本若需运输，应保持2-8℃或冻存状态。

4、标本中避免加入抗凝剂或保护剂或防腐剂，以免影响试验结果。

【检验方法】

1.将恒温箱/水浴设定在37±1°C。

2.使用前将所有试剂恢复至室温（约1小时），但不要将微孔板从袋中取出。

3.将所有组分轻轻摇匀。

4.从包装中取出微孔板，根据需要确定使用孔数，预留4个孔用于对照：两个用于临界值对照，阳性和阴性对照各一个，未使用的孔应放回袋中并密封保存。

5.除用于加对照的孔外，在其余所需孔中各加入25µl的lgG吸附剂，每孔再加入5µl血清样本和75µl稀释液。

6.对照孔先向各孔加入100µl稀释液，然后分别向相应的对照孔中加入5µl阳性对照、5µl临界值对照（做复孔）以及5µl阴性对照。

6.若手工操作，需将板置于板振荡器上震荡（2分钟），使试剂充分混匀，微孔板中加入100µl稀释液与5µl血清样本。

7.用封板膜覆盖，37±1°C孵育45分钟。

8.取下封板膜，吸去各孔液体，每孔用0.3ml洗涤液洗板五次，拍干残留液体。

9.立即向每孔加入100µl酶标抗体溶液。

10.用封板膜覆盖，37±1°C孵育30分钟。

11.取下封板膜，吸去各孔液体，每孔用0.3ml洗涤液洗板五次，拍干残留液体。

12.立即向每孔加入100µl显色底物溶液。

13.避光，室温孵育20分钟。

14.立即向所有孔中加入50µl终止液。

15.终止反应后1小时内使用分光光度计在450/620nm波长读数。

备注：将浓缩洗涤液用蒸馏水1：20稀释待用（如：1ml浓缩洗涤液---19ml蒸馏水）

【检验结果的解释】

1、目测：在白色背景下观察各孔显色情况，黄色者为阳性，无色者为阴性。

2、酶标仪测定：每孔加终止液50ul，混匀后在450nm波长下以空白孔调零后测定各孔O.D值。阴性对照OD≤0.5；阳性对照OD≥0.9；0.55≤临界值OD≤1.5

3、质控品OD值要符合说明书区间则实验结果成立，否则实验可能产生偏差，需重新试验。

【阳性判断值或者参考区间】

结果计算与解释

计算截断血清的平均OD值。

抗体指数=(样本OD/截断血清平均OD)×10

结果为临界值的样本必须重新检测和/或采集新样本进行确认。

检测指数低于9的样本被认为不含有本试剂盒所测定特异性和类别对应的抗体。

检测指数高于11的样本被认为含有本试剂盒所测定特异性和类别对应的抗体。

【检验方法的局限性】

1、本试剂盒检测结果只作为辅助诊断，疾病的确诊需要结合临床症状/体征和其他检查方法方可做出判断。

【产品性能指标】

1、灵敏度：检测100份阳性标本，检测结果为阳性有99份，灵敏度为99%。

2、特异性：检测100份阴性标本，检测结果为阴性有100份，灵敏度为100%。

2、批内差：同一批次的试剂，对一份阳性血清进行测定，各板孔对测定结果的变异系数小于15%。

【注意事项】

1、试剂盒仅供体外诊断用。

2、微孔板须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置2-8℃短期

内用完。

3、滴加试剂前应将滴瓶翻转数次混匀，滴加时保持瓶身垂直。

4、洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。

5、试剂置2-8℃存放，不能冻结。

6、本试剂盒中阴阳性对照虽不含人源性血清成分，但应严格按常规作为污染物处理。

【参考文献】

原创作者：深圳市恒昊生物科技有限公司