保存与运输方法
保存:其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存,三个月有效。
运输:干冰运输。
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, MEL1GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
注意事项
1. 好在冰上融化感受态细胞。
2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
3. AH109对高温敏感,适生长温度为27-30℃,一旦高于31℃,生长速度和转化率都呈指数下降。
4. 菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE4,5,6,7,8基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆;
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 取100 µl冰上融化的AH109化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA(95-100℃孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µl,PEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30℃水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
2. 之后将管子放42℃水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。



