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EGY48 Chemically Competent Cell
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更新日期：2026/8/7 17:13:02
生 产 地：中国大陆
产品型号：CC96405
商家名片
张**
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详细内容
保存与运输方法
保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存。
运输：干冰运输。
基因型
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
注意事项
1） 好在冰上融化感受态细胞。
2） 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
3） EGY48对高温敏感，适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
4） 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
5） 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1） 取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
2） 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
3） 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。
4） 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。
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