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细胞检定样品，您用对了吗？
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细胞库检定是部分生物制品生产过程中必不可少的环节，各国药典对细胞库检定的检项都有详细的规定。不同的检项对样品类型（混悬、上清、裂解液…）和样品需求量有着明显的差异。差异的背后反映了各个检项的技术原理、检测限度以及对法规风险的考量。在委托检验中，提供具有代表性的样品是保障检测结果准确的前提，那么您的样品送对了吗？
本文将基于中、美、欧药典的法规要求，对细胞库检定样品需求进行系统梳理，并欢迎业界同仁一起探讨。
1、 各检项样品要求分析
| 检项 | 提供样品类型 | 实验室处理 | 样品量 |
|---|---|---|---|
| 细胞鉴别 | 细胞悬液、冻存细胞 | 根据不同检测方法处理 | 不同的检测方法有不同的要求 |
| 无菌检查 | 上清和冻存细胞 | / | MCB/WCB上清≥10mL或冻存细胞取总数≥1%或≥2支，直接接种法每种培养基约需样品1mL |
| 分枝杆菌检查 | 上清 | 参考无菌检查 | |
| 支原体检查 | 上清或细胞悬液 | 悬液离心成细胞沉淀 | 0.5‑1.0ml/支（ChP） |
| 螺原体检查 | 上清或细胞悬液 | / | 0.5‑1.0ml/支（ChP） |
| 内外源病毒 检查 | 上清和冻存细胞管 | 细胞裂解 | 上清≥10ml |
| 成瘤性检查 | 细胞悬液 | / | 满足动物接种所需的细胞数量和体积，具体剂量根据细胞系和动物模型确定 |
| 致瘤性检查 | 细胞悬液 | 裂解 | 取含10⁷个细胞的裂解液50～100μl |
注：欧洲药典支原体检查要求上清和细胞悬液都进行检测
二、样品要求和实验室处理原因解析
细胞鉴别：目标是确认细胞身份和遗传特征，需要完整的活细胞或提取的DNA；
无菌检查：目标为细菌和真菌，主要存在于培养液和冻存环境中，上清和冻存管都需要检测；
分枝杆菌检查：目标为分枝杆菌，与无菌检查类似，可以参照无菌检查法；
支原体检查：支原体既可游离于培养液中，也可附着于细胞表面甚至侵入细胞内。欧洲药典（EP）明确要求提供细胞沉淀和上清双样本；
螺原体检查：与支原体类似，样品类型可参照支原体检查；
内外源病毒污染检查：病毒分布复杂，有些分泌到上清中，有些留在细胞内，有些以整合形式存在，需同时检测上清和细胞悬液。
成瘤性检查：需要在动物体内形成肿瘤，必须是具有活力的完整细胞；
致瘤性检查：检测的是样品成分诱导宿主细胞肿瘤转化的能力，因此必须使用没有活细胞的细胞裂解液或者提取出来的DNA。
三、不同检项送检样品的重点注意事项
细胞鉴别：应提前与受托方沟通确认受托方使用的检测方法，提供正确类型的样品和合适的样品量；
无菌检查：为确保样品的代表性，冻存细胞样品必须整支冻存管送检；
分枝杆菌检查：分枝杆菌检查周期较长（56天），应提前规划好样品；
支原体检查：欧洲申报必须同步检测细胞沉淀和上清两种样品；
内外源病毒污染检查：上清和细胞悬液都需要检测；
成瘤性检查：切勿冻融，需要活细胞；
致瘤性：应该没有活细胞，需要冻融3次获得裂解液。
四、委托方在样品送检时的两大核心法则
1 厘清工作范围
送样前应厘清送的是什么样品，确定检测样品的前处理，如提取，复苏、扩培等，由哪一方完成？
大多数情况下，送检的是初始样品，如细胞悬液、上清或冻存细胞管，因此需要在送样前与检测机构充分沟通样品处理的工作范围。
2 确定“三问”再送样——“检什么、送什么、报哪里”
检测的目标决定了初始样品的类型，因此要确认好，项目是全检还是检测其中的某几个检项。根据不同检项的需求，准备不同的样品。
另外，产品的申报国家，对初始样品也有影响。同样的检项，不同国家药典要求可能完全不同（如支原体检查）。
因此，送样前应该带着这三个关键问题的思考和反馈，去准备合适的样品。
义翘神州（苏州）实验室简介
义翘神州生物安全检测实验室已经协助过多家药企的国内外不同阶段的申报，对不同检项和不同申报国家关于检测样品的要求有深刻的理解和掌握，我们的客户只需要告诉我们的项目人员需要检测哪些检项，我们将快速响应并提供样品需求清单，您只需按照清单准备样品即可，欢迎随时垂询！
原创作者：北京义翘神州科技股份有限公司
