小鼠T淋巴细胞HT-2的复苏与传代及冻存操作说明！

　　小鼠T淋巴细胞HT-2取自BALB/c小鼠，此为白介素2依赖株，悬浮培养。

　　细胞名称：小鼠T淋巴细胞HT-2

　　产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

　　细胞数量：1x10^6；1x10^6

　　保存温度：37℃；-198℃

　　运输方式：常温保温运输；干冰运输

　　安全等：1

　　用途限制：仅供科研3类

　　培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）+200u/mlIL2

　　培养温度：37℃

　　二氧化碳浓度：5%

　　注释：倍增时间34h

　　用途：细胞系

　　注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

　　细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）

　　实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1、从液氮罐中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

　　2、从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液，加到离心管并滴加5倍以上培养基并混匀。

　　3、操作离心，调至1000转/分，时长10分钟

　　4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在T25培养瓶中加入5-6ml培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

　　5、次日更换一次培养液，继续培养。

　　6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个T25培养瓶中

　　细胞传代操作说明（贴壁细胞）

　　实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1、细胞于培养箱中，愈合度达到80%，可进行传代。

　　2、按T25培养瓶计，吸出培养基，并PBS缓冲液轻冲3遍，添加0.25%含EDTA胰酶2ml，消化2min（具体时间视细胞而定），后用培养基将细胞冲洗下来。1000r/min离心10min，弃上清收集细胞，铺至2个T25培养瓶中培养，各添加7ml培养基。

　　3、注意：消化时间不易过长，消化血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。

　　细胞传代操作说明（悬浮细胞）

　　实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。

　　2、按T25培养瓶计，吹打均匀，吸出培养基，1000r/min离心10min，弃上清收集细胞，铺至2个T25培养瓶中培养，各添加7ml培养基。

　　3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。

　　细胞冻存操作说明

　　实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗，DMSO

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔

　　实验步骤：

　　1、取待冻存的细胞（按T25计）用0.25EDTA胰酶2ml消化2min，用培养基将细胞冲洗下来。1000r/min离心10min，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。

　　2、加入1ml冻存液(90%FBS+10%DMSO)制成细胞悬液。

　　3、细胞悬液装入3支冻存管中。

　　4、冻存管在4℃下存放30min，转放-20℃1.5～2h，再转人-70℃4-12h后即可转移到液氮内(-196℃)，并登记。

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　　公司提供细胞系人源做过STR鉴定，其他做过种属鉴定，确保产品无误后方可提供客户，形式冻存或复苏节省客户时间；确保实验顺利。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞