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H9人胚胎干细胞的培养说明 智立中特生物
点击次数：49 发布时间：2022/5/23 15:03:52
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王**
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一、细胞简介：
细胞名称：H9人胚胎干细胞(STR鉴定）
细胞描述：人胚胎干细胞，曾用名WA09
形态：球形克隆，贴壁生长
来源性别：女性
组织：内细胞团
冻存日期/代数：详见冻存管/培养瓶标识
建议复苏培养体系：1个T25培养瓶或6cm培养皿
细胞状态：良好
支原体检测结果：阴性
细胞用途：仅供科研使用。
二、STR鉴定结果：
三、细胞的培养步骤：
H9细胞培养基培养人胚胎干细胞
1.试剂和材料
H9细胞培养基试剂盒
所需的其它试剂和材料
2.培养流程
1）复苏
在开始复苏，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。
1.将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
2.使用移液管将冻存管中含有H9细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
3.室温300g离心5min。
4.吸出培养基，确保细胞团完整。
5.然后缓慢加入1mL培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
6.轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据终培养细胞的液体体积，加入ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。
7.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提预热）。
2）传代
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1.传代，准备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，培养基。
2.吸走上清，并加入37℃预热好的PBS溶液清洗1次。
3.加入适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。
4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5.加入适量的培养基终止消化。
6.移入离心管，300g离心5min，
7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8.传代比例为1：6—1：8，根据终培养细胞的液体体积，加入ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。
9.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提预热）。
3）冻存
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1.传代，准备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，培养基。
2.吸走上清，并加入37℃预热好的PBS溶液清洗1次。
3.加入适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。
4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5.加入适量的培养基终止消化。
6.移入离心管，300g离心5min。
7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8.使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按6孔板每孔冻1支，6cm皿冻2-4支，10cm皿冻6-12支（冻存液为：90%H9细胞培养基与10%的DMSO。
细胞名称：H9人胚胎干细胞(STR鉴定）
- 平台编号: zl-055912
细胞描述：人胚胎干细胞，曾用名WA09
形态：球形克隆，贴壁生长
来源性别：女性
组织：内细胞团
冻存日期/代数：详见冻存管/培养瓶标识
建议复苏培养体系：1个T25培养瓶或6cm培养皿
细胞状态：良好
支原体检测结果：阴性
细胞用途：仅供科研使用。
二、STR鉴定结果：
三、细胞的培养步骤：
H9细胞培养基培养人胚胎干细胞
1.试剂和材料
H9细胞培养基试剂盒
所需的其它试剂和材料
另需细胞培养皿/瓶/板，15mL离心管和移液管等细胞培养耗材
2.培养流程
1）复苏
在开始复苏，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。
1.将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
2.使用移液管将冻存管中含有H9细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
3.室温300g离心5min。
4.吸出培养基，确保细胞团完整。
5.然后缓慢加入1mL培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
6.轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据终培养细胞的液体体积，加入ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。
7.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提预热）。
2）传代
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1.传代，准备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，培养基。
2.吸走上清，并加入37℃预热好的PBS溶液清洗1次。
3.加入适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。
4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5.加入适量的培养基终止消化。
6.移入离心管，300g离心5min，
7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8.传代比例为1：6—1：8，根据终培养细胞的液体体积，加入ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。
9.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提预热）。
3）冻存
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1.传代，准备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，培养基。
2.吸走上清，并加入37℃预热好的PBS溶液清洗1次。
3.加入适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。
4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5.加入适量的培养基终止消化。
6.移入离心管，300g离心5min。
7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8.使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按6孔板每孔冻1支，6cm皿冻2-4支，10cm皿冻6-12支（冻存液为：90%H9细胞培养基与10%的DMSO。
智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，生产，销售，售后为一体的高新技术产业公司。拥有载体质粒，载体，国内外微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等广泛的生产销售线。
质粒载体产品：
提供各种类型载体宿主，基因种属类型，抗性，设计并构建质粒：大肠杆菌表达载体；哺乳动物表达载体；酵母表达载体；昆虫表达载体；植物表达载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24
pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9
pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及结合转移质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
质粒菌种产品：
E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170
菌种产品：
提供模式菌种，科研菌种，普通菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物标准品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等
原代细胞和细胞系产品：
现取不同组织现分：不同来源人/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、列腺、心脏、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；列腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞
公司提供细胞系人源做过STR鉴定，其他做过种属鉴定，确保产品无误后方可提供客户，形式冻存或复苏节省客户时间；确保实验顺利。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞
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