人弥漫性大B淋巴瘤细胞的培养与处理方法！

　　产品名称：TMD8人弥漫大B淋巴瘤细胞

　　规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

　　种属来源：人

　　组织来源：B细胞

　　细胞形态：淋巴母细胞样

　　生长特性：悬浮生长培养体系DMEM高糖+10%FBS+1%双抗

　　培养温度：37℃二氧化碳浓度5%

　　传代方法：建议1:2

　　传代情况：2~3天换液

　　冻存条件：无血清冻存液

　　细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。

　　细胞备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养

　　注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用产品信息以出库为准

　　TMD8人弥漫大B淋巴瘤细胞收到后处理：

　　细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的培养液收集至离心管中，加入6ml培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

　　TMD8人弥漫大B淋巴瘤细胞培养步骤：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。

　　3、轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。

　　对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

　　方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

　　TMD8人弥漫大B淋巴瘤细胞注意事项：

　　1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

　　2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；

　　3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；

　　4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；

　　5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；

　　6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通。