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如何构建稳定细胞株？构建方法及注意点

点击次数：37 发布时间：2023/8/14 10:44:47

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肖**

联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!

　　实验中很多情况下我们都要用到稳定细胞系，但质粒建系时间长，成功率低，很多时候耗时半年还不见成效，眼看别人实验都收尾了，自己这边却还没有动静，耗在上面的时间精力足够写一篇血泪史！

　　但是现在不用担心！

　　,天我们就来聊一聊，要稳定建系并且更好！

　　稳定转染，即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。

　　瞬时转染的表达，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，，导致,后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染。

　　那么在什么情况下我们需要构建稳定株呢？

　　1、一般如下情况需要构建稳定株

　　长,期在目的细胞中研究，通过构建稳定株，可以大大或者病毒，也大方便实验研究；

　　部分蛋白半衰期长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的

　　瞬转往往会引入高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精,确，构建稳定株可以帮助进行实验研究；

　　需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；

　　需要用细胞的，比如裸鼠成瘤等，往往需要构建成稳转株

　　2、构建稳定株的方法

　　其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的，但这些方法整合入基因组的效率低，很难成功。而可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，是建立稳定株的,优方式。

　　3、构建稳定株的注意点

　　稳定株构建是个长,期过程，从质粒构建到慢病毒包装，再到细胞感染及后期的筛选，每一步都至关重要，所以建立稳转株花个半年时间，也是常有的事，而且要承担病毒包装不成功，细胞感染效率低等风险。

原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司