技术文章
如何对细胞培养进行快速正确的检测
点击次数：44 发布时间：2023/8/10 17:16:52
商家名片
肖**
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 18******396
- 手机: 18******396
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
本文介绍了对培养贴壁细胞系进行传代的一般工作流程及步骤说明。哺乳类细胞体外培养是在癌症、药物开发、组织工程、干细胞、疾病细胞和分子生物学等生物医学研究域进行临床和药物研究的重要模型。要想成功维持细胞系，需要通过控制生长条件来维持细胞生理和表型的稳定性。定期监测细胞生长，对细胞进行传代培养以确保连续性。
背景
哺乳类细胞培养对临床和药物研究与应用至关重要，其可用于构建灵活的健康和疾病模型系统。例如在机能研究可支持电脑模拟分析并可用于替代动物模型。
细胞增殖取决于细胞类型（从动物组织分离的原代细胞、胚胎干细胞、自我更新细胞、稳定永生化细胞系、转化细胞）和培养条件（培养基、2D/3D细胞外基质、温度、PH值、CO2/O2浓度）。在，佳培养条件下可以培养出用于各种实验分析的细胞。随着动物细胞培养技术的进，步，细胞系逐步演变并被用于疫苗生产、治疗性蛋白、药物制剂和抗癌制剂。
要想成功维持哺乳类细胞系，必须在受控条件下培养细胞并使用特定培养基。此外，为保，证细胞生理和表型的稳定性，必须定期监测细胞生长状况。通常情况下，当细胞汇合度达到80%左右，须对细胞进行传代培养，以确保细胞生长良好且健康。细胞汇合度达80%指的是培养皿80%的表面被细胞所覆盖。注意：传代培养细胞的，佳汇合度取决于细胞类型且可能还需优化。
为何需要对细胞进行传代？
培养的细胞不可能无限生长，原因在于在有限的空间内细胞数量不断增多，营养物质消耗，有毒代谢物增多终导致细胞死亡。此外，研究人员通常需要重复实验，因此需要对培养细胞进行削减或扩增。经过传代后细胞能生成相比原先密度更低的新细胞。去掉旧的培养基，将细胞转移至新鲜培养基和基质中，补充新鲜营养物质并清除有毒代谢物能够长，期维持培养细胞。一开始接种细胞后，细胞生长进入迟滞期然后是对数生长，期，此时细胞呈指数增殖，接着进入静止期，此时细胞生长率和死亡率持平。（见图1）。进入衰亡期，细胞因缺乏营养物质或培养条件不充足而死亡，例如细胞因汇合度过高开始争夺生存空间。
要使细胞处于，佳培养条件且维持活跃增长，有必要更新培养基并定期进行传代培养。可根据细胞类型在对数生长，期多次更换培养基。传代培养的，佳时间位于对数生长，期和静止期之间，在细胞达到密集状态进行。
为何需要检查细胞？
每日以及在传代培养检查细胞培养物非常重要，以此监测细胞健康状况、检查污染情况、确定细胞分离时间。先用肉眼检查培养基中是否出现真菌污染、培养基浑浊度和颗粒情况，以及通过培养基的颜色变化发现意外的pH值变化。先用肉眼检查培养基中是否出现真菌污染、培养基浑浊度和颗粒情况，以及通过培养基的颜色变化发现意外的pH值变化。之后应使用倒置显微镜近距离检查细胞整体形态和生长模式。倒置显微镜的光学元件位于样本下方。由于细胞附着在培养皿底部，从底部视角便于观察。由于正常明场照明下难以观察到大多数细胞，因此应在100至200倍的总放大倍数和相差下进行观察[1]。
哺乳类细胞有很多种形态，但培养出的哺乳类细胞大多可分为3类：成纤维细胞【中国仓鼠卵巢（CHO）细胞】、上皮样细胞【人类子宫颈（HeLa）细胞】以及淋巴样细胞【人类白血病（HL60）细胞】。此外，某些细胞系具有特定的形态特征，例如神经细胞（SH-SY5Y）具有很长的树突。细胞形态还受细胞生命周期活动影响。在有丝分裂过程中，许多细胞变得更圆，形成可在培养基中漂浮的高折射性发亮球体。死亡细胞的细胞膜完整性发生变化，细胞变得更圆，贴壁细胞从生长表面分离。在显微镜下，死亡细胞通常不会发亮及产生折射，它们通常的细胞膜形态可能会发生改变
不同细胞系不仅尺寸和形状不同，生长特性也有所不同。它们要么发展成贴壁细胞（成纤维细胞和上皮细胞），要么发展成悬浮细胞（淋巴样细胞）。大多数贴壁细胞系会生成单细胞层，附着在玻璃或经处理的塑料基板上（例如涂有聚赖氨酸、纤连蛋白、胶原蛋白或明胶）。
如何传代培养细胞？
常见的传代细胞制备方法是使用胰蛋白酶等蛋白水解酶分解细胞间及细胞与培养基之间的黏合。胰蛋白酶和乙二胺四乙酸的共同作用使细胞从生长表面脱离。胰蛋白酶切断将细胞固定在培养皿上的黏着斑，乙二胺四乙酸则作为钙螯合剂。
根据细胞类型或下游实验也可使用其他蛋白酶代替胰蛋白酶，如天然胶原酶或合成消化鸡尾酒溶液等。
将参与细胞间相互作用的钙粘蛋白中的钙成分去掉，从而分解钙粘蛋白，将细胞分离开来。细胞一旦失去与生长表面和周围细胞的黏合，就能轻易分离并在新的细胞培养皿中生长。细胞一旦失去与生长表面和周围细胞的黏合，就能轻易分离并在新的细胞培养皿中生长。图2描述了传代培养工作流程的基本步骤。在整个传代培养过程中重要的是，要在无污染环境下工作。在传代培养初始阶段、胰蛋白酶分解过程中、细胞计数环节以及细胞分离后都要检查细胞状况。保持正确记录和归档对于获得一致结果和实验追溯同样非常重要。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
