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细菌中蛋白质的提取与纯化方法步骤
点击次数：93 发布时间：2023/7/11 10:23:49
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细菌中蛋白质的提取与纯化实验试剂
1.使用，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。
2.按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。
D6948-00B:加入8ml无水乙醇
D6948-01B:加入80ml无水乙醇
D6848-02B:加入80ml无水乙醇
细菌中蛋白质的提取与纯化实验步骤
1.取1.5-5ml菌液10，000 x g室温离心1min收集菌体沉淀；
2.小心去除上清液，加250ul Solution I/RNase，涡旋或用移液枪上下吹打重悬菌体。
3.加250ul SolutionⅡ，来回颠倒4-6次轻柔混匀，得到澄清的裂解液。
4.加125ul Buffer N3，颠倒混匀几次直至出现白色絮状沉淀，室温放置2-3min让其充分反应。
5.12，000×g室温或4℃离心10min得上清，把上清转移到一个新的离心管内；
6.加入与上清等体积的ETR Binding Buffer，颠倒混匀7-10次，室温放置5min。
7.结合质粒——把结合柱插入2ml收集管，每次转移700ul混合液至结合柱柱里，8，000×g离心1min，弃滤液。
8.重复第7步，直至所有上清都过滤完，弃滤液。
9.加入500ul ETR Wash Buffer到结合柱上，8，000×g离心1min，使全部液体滤过柱子，弃滤液。
10.加入500ul Buffer EHB到结合柱上，8，000×g离心1min，使全部液体滤过柱子，弃滤液；
11.加入700ul DNA Wash Buffer到结合柱上，8，000×g离心1min使全部液体滤过柱子，弃滤液；
注意：浓缩的DNA Wash Buffer在使用之必须按标签的提示用无水乙醇稀释。
12.加入700ul DNA Wash Buffer到结合柱上，8，000×g离心1min使全部液体滤过柱子，弃滤液；
13.把空柱子套回离心管，zui大转速（不超过13，0 0 0×g）离心2min干燥柱子；
14.把结合柱套在一个新的1.5ml离心管中，加入30-50ul Endotoxin-Free Elution Buffer，室温放置2-5min，zui高转速离心1min洗脱质粒DNA。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
