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培养细胞生长状况的观察
点击次数：151 发布时间：2023/6/13 16:28:51
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常规观察：
一、培养液的颜色与透明度
二、细胞形态变化
三、细胞污染的观察及防治
四、细胞生长状况
（一）培养液的颜色和透明度
状态好的细胞透明度大，折光性强，轮廓清楚，分裂期细胞多见。
状态差的细胞，失去原来的特点，胞质出现空泡、颗粒，细胞变形，出现死亡。
培养液澄清，培养液颜色在指示剂的反映下显示为中性范围。
（二）培养细胞的形态观察
1、常规采用倒置显微镜观察，基本有两种形态：
倒置显微镜
2、活细胞的观察
相差显微镜
把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。
培养皿上下尽量平行，瓶壁不能太厚，划痕不宜过多，去除漂浮细胞及死细胞。
（三）细胞生长状况的观察
1、培养细胞活力测定
任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
a、培养细胞活力测定——台盼蓝法
活细胞不被染色，死细胞染成蓝色；用活细胞占细胞中的百分比表示细胞活力；
方法：
1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中；
2、加入0.5ml 0.4%台盼蓝染液，染色2一3分钟；
3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片；
4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力；死细胞能被台盼蓝染上色，镜下可见深蓝色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
b、细胞活力测定－－-MTT比色法
四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝
四唑盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值。
MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性实验等。
c、细胞计数
它是了解细胞生长状态的量化指标。
制备细胞悬液，密度不低于10000细胞／ml，用10×物镜观察计数板四角大方格的细胞数。
计数：细胞数／ml原液＝（4大格细胞数之和÷4）×104
注意要点：细胞分散均匀制成单个细胞悬液；计数时数上不数下；数左不数右。
d、流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）
细胞表型分析、胞内蛋白的检测、细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
