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细胞冻存操作方法及其注意事项 ！
点击次数：188 发布时间：2023/2/14 14:39:14
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一、细胞冻存操作
方法：
冻存液，好现配：按1：3：6（或1：2：7）配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理，
对于贴壁细胞：
1吸出旧培养液加PBS冲洗一次
2胰酶消化
3加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止
4离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）
5吸出离心管上清液，加1ML的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20度两小时，-70度过夜，再放液氮长，期保存
悬浮细胞：直接离心收集，PBS洗涤
二、细胞冻存注意事项：
1.错误的时机：细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。
解决：
，佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。
2.细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。
解决：离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）。
3.盖子不紧：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。
解决：选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别）。
4.单薄的冻存盒：放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。
解决：选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）
5.-80度太久：放在－80度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）
解决：尽快转入液氮。
6.液氮不足：液面不能漫过所有细胞
解决：定期测量液氮储备，保，证细胞全部浸在液面下。
7.取错细胞：找不到/拿错冻存管。
解决：每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。
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