细胞冻存方法及目的

　　哺乳动物细胞冷冻保存

　　主要目的：

　　（1）保存种子细胞，以便随时取用。这是保存细胞的zui主要目的。

　　（2）减少细胞被微生物污染的危险性。

　　（3）减少细胞之间交叉污染的危险性。

　　（4）减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。

　　（5）避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。

　　(6)降低人力和物力。

　　冷冻保存细胞的解冻与复苏要点：慢冻快融

　　（1）快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。

　　（2）解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱，不仅解冻速度要快，而且动作要轻。一般情况下，解冻后的细胞可直接接种到含*生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养（1ml冻存细胞液加入到25－30ml新鲜*培养液中），24小时后再用新鲜*培养替换旧培养液，以去除DMSO。如果，细胞对冷冻保护剂特别敏感，那么，解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含*生长培养液的培养瓶中。

　　特别注意：

　　（1）解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂。，要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入37℃水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。

　　（2）冷冻管在水浴中解冻时，要将冻存管盖子拧紧，确定拧紧后再投入水浴锅中，注意液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染。

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