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智立中特HK-2细胞培养技巧
点击次数：36 发布时间：2023/1/4 14:18:27
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细胞名称HK-2（人肾皮质近曲小管上皮细胞）
种属人
年龄（性别）成年
组织来源
生长特性贴壁
细胞形态上皮细胞样
背景描述HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，，后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
生长培养基MEM＋10%FBS＋1%P/S
培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃
人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK-2，取自正常成人肾脏的永生化近端小管上皮，通过转入HPV-16 E6/E7基因构建而成，并在无血清培养基中持续生长了一年多。HK-2的生长依赖于表皮生长因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。
阳性表达：碱性磷酸酶；γ-谷氨酰转肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；细胞角蛋白;α3β1整合素；纤连蛋白。
阴性表达：因子VIII相关抗原、6.19抗原和CALLA内肽酶呈阴性。
在培养HK-2细胞的时候，常会出现一些细节问题，不可掉以轻心。以下是小编为大家准备培养HK-2细胞常见的问题，以及解决方案。
1.出现拉丝
细胞伸出细长的丝有两种情况：
第，一种情况是细胞迁移造成的，细胞在培养皿上并不是静态的，也会出现迁移。迁移时细胞的一部分滞留在原处，迁移的过程中会拉出一条细长的丝。这种情况下拉丝的细胞占少数，细胞整体的生长状态是正常的，不用特殊处理。
第二种情况是营养不良，拉丝的细胞占大多数，同时细胞生长缓慢，此时可以提高血清比例（不超过20%）或添加5 ng/mL EGF。
2.形态不对
正常的HK-2呈铺路石状生长，如果细胞呈镰刀状或不规则状（如下图），可能是因为培养环境发生了较大的改变，比如从有血清到无血清的转换，此时换回原来的培养条件细胞可逐渐恢复；如果细胞变得细长，这时候可能是营养不良。
3.出现空泡
空泡问题需要结合生长速度和形态来看：如果生长速度和形态正常，空泡可能是正常的细胞活动，传代后空泡即可减轻。
如果生长较慢，形态异常，空泡可能是自噬行为，可加大血清比例（不超过20%）或更换血清品牌改善细胞状态。
4.生长缓慢
在标准培养条件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3传代条件下，HK-2的传代周期约为3天。
当细胞生长缓慢，一周无法传代时，需要考虑培养基特别是血清是否合适。选择合适的培养基及血清，同时加大细胞接种密度可以改善。
培养基选择：
HK-2初建系使用无血清培养，众多文献以及实践证明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的条件下，HK-2也能良好生长。但胎牛血清的质量是关键，胎牛血清品质越高，HK-2状态越好。若使用无血清培养基培养，需要使用多聚赖氨酸或者明胶包被培养瓶，以促使贴壁。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
