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智立中特生物GBC-SD人胆囊癌细胞传代培养
点击次数：38 发布时间：2022/12/12 15:11:15
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细胞描述
细胞是从一名74岁男性胃胆囊癌患者组织中分离得到，ZJU-0430的迁移，侵袭和增殖能力远大于GBC-SD细胞，可用于胆囊癌（GBC）的发病机理和治疗的临床研究，并可能有助于开发早期诊断工具以及潜在的靶向疗法。
细胞特性
1）来源：人，男性，胆囊癌
2）形态：上皮样，贴壁生长
3）含量：>1x106细胞数
4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途：仅供科研使用。
细胞培养过程中，传代是非常重要的环节，若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害，原代细胞因其培养难度高且传代次数有限，细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。根据其丰富的原代细胞培养经验，总结出一套细胞消化的方法，有效降低了消化步骤对细胞的操作。文韧生物现分享给大家：
1.当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。
2.提准备好多聚赖氨酸（PLL，货号0403）或纤维粘连蛋白（BPF，货号8248）包被好的培养瓶。
3.将完，全培养基，胰酶/EDTA消化液（T/E，货号0103），胰胰中和液（TNS，货号0113）和不含钙镁离子的DPBS（货号0303）加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。
4.用DPBS冲洗细胞。
5.以T-75培养瓶为例，向培养瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保，证细胞被胰酶/EDTA消化液完，全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。
6.在消化期间，准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清（FBS，货号0500）。
7.将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中（一小部分细胞已消化下来），将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟（此时培养瓶中没有液体）。
8.在孵化结束时，轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。
9.向培养瓶中加入5ml胰酶中和液，将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶，以保，证所有细胞被收集。
10.在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功，细胞数量应小于5%。
11.以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟，然后在培养基中重悬细胞。
12.细胞计数，然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
