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冻存细胞的这些坑，你踩过吗？
点击次数：80 发布时间：2022/11/4 12:42:42
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肖**
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冻存细胞的错误时机主要有：细胞量太少，细胞状态不好，细胞变形严重，或者细胞生长堆积，一旦生长过平顶期，培养基就会变得很黄，细胞可疑污染；镜下观察细胞有很多碎片或者不明物；培养时间过长，连续培养超过二个月，细胞性状已有改变）。
解决方法：
选择细胞冻存的,佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内开始冻存一批，再往下传的用来做实验。
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1.细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5*10^5CELL/VIAL,复苏很难成功,原因：细胞和细胞间会又间隙接触反应,解决：离心后调整细胞浓度，把细胞种更小的孔板中.
2.培养基很黄时，冻存复苏后几天不长：在细胞生长平顶期冻存的细胞会在解冻后有几天停滞状态，原因：细胞在生长平顶期已经停止生长，冻存后也保持互相间抑制的信号，解决办法：用胰酶消化重新铺板；
3.细胞污染或者有很多小黑点：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。复苏细胞的时候尽量避免冻存管接缝处沾水，防止支原体污染，实验室定期用过氧化氢熏蒸，细胞小黑点增多时用支原体检测试剂盒检测，并且及时清除，趁高温假给细胞来次清洁吧，支原体抑制剂买二送一，价格低到您不能想象哦。
4.程序降温盒导致的细胞复苏不活：放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温，使用普通的冻存液抗氧化和抗冻添加物不够，导致细胞内产生大量冰晶杀死细胞.
5.-80度太久导致细胞状态不好，原因：冰箱的温度难以恒定：开门/关门过于频繁，冰箱电压不稳等.解决办法：尽快转入液氮。
6.液氮不足：液面不能漫过所有细胞。解决：定期测量液氮储备，保,证细胞全部浸在液面下，小提醒：有几个细胞需要气相保存的，不能浸入液氮里，挪细胞的时候需要注意一下。
7.取错细胞：找不到/拿错冻存管。原因：没有标记好细胞，没有做好库存记录，解决：冻存细胞时在每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。
智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致,力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长,期保存管理；在保,证生物安全和保护知识产权的提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！
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