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Caco-2细胞生长特性和常见问题解决策略
点击次数：79 发布时间：2022/10/24 15:37:33
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Caco-2(人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌，人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后，自发分化为肠上皮样细胞，是常用的肠癌细胞模型。
生长特性
呈岛状生长
Caco-2细胞群的边界光滑，视野中一个个细胞克隆如同海上小岛一般。
空泡多
Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡，这是细胞本身的特性，属于正常现象。
难消化
Caco-2细胞与细胞间连接紧密，使得细胞难以解离。通常加入胰酶后，细胞克隆的四周先飘起来，中间仍贴壁；随后整片克隆脱落，但细胞与细胞间不会分散。消化时间为5-10分钟，该细胞难以被吹散为单个细胞，当细胞能够被吹散为小的细胞团块，即可终止消化。
贴壁慢
Caco-2贴壁缓慢，在标准培养条件MEM（含NEAA）＋20%FBS＋1%P/S】下，接种后约24~72小时完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。
生长慢
Caco-2细胞传代周期较长，这是因为Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:4传代的情况下，约一周传代一次。
常见问题
细胞不贴壁怎么办？
Caco-2细胞培养基里添加的胎牛血清比例为20%，当血清比例降低，贴壁性下降时，补充胎牛血清至20%，继续培养1-2天，细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱（呈紫红色），偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁。
能否用DMEM替代MEM？
可以。DMEM（Dulbecco＇s Modified Eagle Medium）是在MEM培养基的基础上研制的。Caco-2细胞在DMEM+20%FBS+1%P/S条件下生长状态正常。
MEM中不含NEAA会怎样？
当使用不含NEAA的MEM培养基时，Caco-2生长速度可能下降，漂浮细胞增多。
细胞消化不下来怎么办？
如果消化5-10分钟，细胞部分脱落，另一部分仍然贴壁紧密，可以将脱落细胞转移至离心管，向原瓶中加入新的胰酶，放入培养箱继续消化剩余细胞，每隔1min拿出来观察，直到细胞滑落。
漂浮细胞多怎么办？
有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上，是正常的，随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞，可以减少漂浮细胞产生。
如果Caco-2细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。
注意事项
01：细胞贴壁慢特别是刚复苏时，一般2-3天贴壁展开，会有空泡。
02：Caco-2细胞在传代细胞中，注意消化散，否则难以贴壁。
03：成团生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多。
04：一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大。
05：细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡。
06：Caco-2细胞生长时间越长，消化时间越长。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
