智立中特RW.4小鼠胚胎干细胞一般培养方法

　　描述：小鼠全能性胚胎干细胞，每支细胞量1×106

　　动物种别：小鼠，129X1/SvJ品系

　　性别：雄

　　组织来源：小鼠胚胎内细胞团

　　形态：球形克隆

　　培养基和添加剂：mES完，全培养液配方（600 ml）：DMEM(Invitrogen 12430)497 ml ESFBS(biochrom S4115)90 ml Glutamax(Invitrogen 35050)6 ml NEAA(Invitrogen 11140)6 ml LIF(Millipore ESG1107)60μl（终浓度为1000U/ml）β-Mer(Invitrogen 21985)1.5 ml气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

　　供应限制：A。仅供研究之用。

　　RW.4小鼠胚胎干细胞一般培养方法:

　　1、组织块培养法

　　A）按照述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。

　　B）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～12.5px，一般在25mL培养瓶（底面积为437.5px2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

　　C）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防RW.4小鼠胚胎干细胞由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

　　2、消化培养法

　　该方法是采用述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

　　3、悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。