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贴壁细胞如何进行传代？
点击次数：52 发布时间：2022/10/10 9:29:21
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肖**
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贴壁细胞需要用到一种特定的试剂——蛋白酶，其作用是切断细胞和容器之间，细胞与细胞之间的相互粘连，用蛋白酶处理细胞的过程叫做「消化」，「消化」之后的下拨会形成单细胞并从容器底部掉下来。常用的蛋白酶是胰蛋白酶。
材料准备：
1、预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；
2、用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；
3、正确摆放使用的器械：保，证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；
4、点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
传代流程：
1.取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
2.从培养箱内取出细胞：注意培养瓶取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
3.将培养瓶放入超净工作台后打开瓶口，同时要在酒精灯上烧口消毒。
4.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞较好好，消化温度是37℃。
5.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。
6.弃去胰蛋白酶液，加入新鲜的培养液终止反应。小心吹打成细胞悬液。
7.将细胞悬液吸入10 ml离心管中。平衡后将离心管放入离心机中，以1000 rpm/min离心5 min。
8.弃去上清液，加入适当体积的培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
9.将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。
10.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。，后要做好标记。
11.继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2-4 h后开始贴附在瓶壁上。
智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致，力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长，期保存管理；在保，证生物安全和保护知识产权的提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！
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