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怎样让细胞乖乖沉睡，满血复活？

点击次数：44 发布时间：2022/10/8 13:22:22

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肖**

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　　经常有用户反映“细胞冻存与复苏遇到了问题”“如何握住原力，让你的细胞乖乖沉睡又满血复活？”下面小编就给大姐总结几点希望能对您的有所帮助！

　　选好细胞冻存液是基础

　　使用动物血清常常会遇到很多问题，例如：病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞，可以消除这方面的隐患。此外，无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长，更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。

　　慢慢做冷冻

　　若您养的是贴壁细胞，请先将细胞消化下来；若是悬浮细胞，请直接按以下步骤进行：

　　1.以200-300g离心3分钟，弃去上清，收集细胞。

　　2.用BI无血清冻存液将细胞重悬（不需回温），将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml，添加到冻存管中（一般每管1ml）。

　　3.建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中，置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜（或不需要程序降温)。

　　4.将冻存管迅速移到液态氮中保存。

　　5.冻存24小时后，建议检测细胞存活率。

　　细胞复苏要迅速

　　1.将细胞冻存管由液态氮中取出，置于室温回温，不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

　　2.在生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

　　3.先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。

　　4.倒去上清液，重悬细胞，移到培养瓶中培养。

原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司