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原代细胞骨架的染色方法-智立中特生物
点击次数：82 发布时间：2022/9/29 13:08:45
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微丝的显示方法步骤：
1.用液漂洗盖片培养的原代细胞3次，每次30s；
2.用2%的甲醛/液固定原代细胞3min；
3.用0.5%的三硝基甲苯/处理3次，每次10min；
4.漂洗3次；
5.用罗丹明（rhodamine）标记的鬼笔环肽（phalloidin）（1：10）室温中反应15min；
6.漂洗3次；
7.60%甘油+荧光防淬剂封片；
8.荧光显微镜观察；
微管的显示方法：
1.用液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；
2.在室温中用3%甲醛/固定20min；
3.用液再漂洗3次，每次1min，，后用滤纸吸干多余的液；
4.投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
5.用漂洗3次，每次1min，，后用滤纸吸干多余的液；
6.向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃温箱中放置45mimdash;1h；
7.向碟皿内匀速缓慢滴加，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；
8.向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；
9.按步骤7和3操作；
10.滴pH8.5的90%的甘油/少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；
11.将盖片置于荧光显微镜下观察。
2021-05-09
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