RT-112人膀胱癌细胞贴壁培养方法

　　产品信息

　　名称RT-112（人膀胱癌细胞）(STR鉴定正确)

　　别称RT112;RT112

　　种属人

　　生长特性贴壁

　　细胞形态上皮细胞样

　　背景描述Establishedfromthetransitionalcellcarcinoma(histologicalgradeG2)excisedfromawoman(ageunknown)withuntreatedprimaryurinarybladdercarcinomain1973;describedintheliteraturetoformtumorsinnudemice

　　生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐换液频率2~3次/周

　　冻存条件冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　保藏机构DSMZ;ACC-418

　　细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备IMDM培养基；优，质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　注：第，一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

　　下面T25瓶为例；

　　1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完，全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

　　2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

　　3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。