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C2C12细胞成肌分化培养方法与流程
点击次数：53 发布时间：2022/8/4 9:38:30
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C2C12作为研究肌肉理想的细胞模型，在实验研究中常诱导其分化为多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用，它是通过一种高度协调的序列程序来产生成熟的骨骼肌的过程。
基础信息
生长特性：贴壁细胞
细胞形态：成肌细胞样
生长培养基：DMEM＋10%FBS＋1%P/S
推荐传代比例：1:3-1:4
推荐换液频率：2~3次/周
倍增时间：~20小时
冻存条件：
冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件：
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
细胞状态直接影响着分化潜力，要想C2C12细胞分化做得好，先要在培养上下功夫。该细胞的换液和传代步骤，参照其他贴壁细胞进行操作即可。除此之外，还有以下三点，需要留意：
1该细胞生长速度快，容易分化，建议密度达70%时传代；
2不要让细胞长得太满甚至开始融合，影响后续成肌分化率；
3细胞消化完,全后再吹打混匀，不要用枪头把没有消化好的细胞吹下来，以免细胞成团。
待细胞生长至汇合度为80%左右时，即可进行诱导分化。具体步骤如下:
01丢弃旧培养基，用PBS清洗两次；
02换分化培养基（高糖DMEM+2%马血清+1%P/S）诱导，然后置于CO2恒温培养箱中进行培养；
03每24h换液一次，在显微镜下观察细胞形态和生长状况。诱导分化成功时，可以看见肌管表现为厚的管状结构，有时为多核。
小贴士
细胞代数不要太高；
若加入分化培养基后，细胞仍然继续生长，可用吉姆萨染色验证是否有分化了的肌纤维；
成肌分化过程中会有少量细胞凋亡，属于正常现象。
原创作者：智立中特（武汉）生物科技有限公司
