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丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒说明书@研尊生物

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上传时间：2021/4/28 16:08:31

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丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为系列复杂的化合
物，其中包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：
MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在 532nm有大吸收
峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm
与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏
水。
试剂的组成和配置：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
注意事项：
临用注意试剂是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。
MDA 提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、吸取 0.6mL 试剂于 1.5mL 离心管中，再加入 0.2mL 样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心
10min。
3、吸取上清液于 1mL 玻璃比色皿中，测定 532nm和 600nm 处的吸光度，记为 A532 和 A600，