联系我们
联系人：蔡经理
技术文章
实时荧光定量PCR无需内标的基础条件
点击次数：81 发布时间：2023/3/8 15:01:56
商家名片
蔡**
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 18******204
- 手机: 18******379
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性ji 好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确，重现性*好的定量方法，已得到全世jie 的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
原创作者：上海研尊生物科技有限公司
