动物组织中甲醛脱氢酶（FDH）活性检测试剂盒 （紫外分光光度法）

动物组织中甲醛脱氢酶（FDH）活性检测试剂盒

（紫外分光光度法）

产品货号：BA1908

产品规格：50T/48S

产品简介：

甲醛脱氢酶存在于绝大多数原核生物以及所有的真核生物中，是一种将甲醛进行转换的氧化还原酶。甲醛脱氢酶可催化甲醛和NAD+产生NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1.试剂二：临用前加入0.25mL蒸馏水，充分混匀；用不完的试剂-20℃分装保存两周，避免反复冻融。

2.试剂二工作液：根据试验所需用量，按照试剂二（μL）∶蒸馏水（μL）=1∶29比例配成工作液，现配现用。试剂二工作液当天配制当天用完。

3.试剂三：临用前加入1.5mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂2-8℃分装保存两周。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照动物组织质量（g）：提取液体积（mL）=1：5~10的比例（建议称取0.1 g动物组织，加入1mL提取液），冰浴匀浆，8000 g，4℃条件下离心10min；取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤）置于冰上待测。

二、测定步骤

1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，用蒸馏水调零。

2.临用前将试剂一、试剂四置于37℃预热10min。

3.在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本、550μL试剂一、250μL试剂二工作液、50μL试剂三、50μL试剂四，立即充分混匀后于340nm处测定20s时的吸光值A1，迅速置于37℃水浴锅或者培养箱中反应5min，拿出迅速擦干测定5min20s时的吸光值A2，记录340nm下20s时吸光值A1和5min后的吸光值A2。计算ΔA=A2- A1。

三、动物组织中甲醛脱氢酶活性计算

1.按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

FDH酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹÷（V样×Cpr）÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

2.按样本质量计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

FDH酶活（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹÷（V样×W÷V样总）÷T×F=321.54×ΔA÷W×F

ε：NADH摩尔消光系数，6220L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，0.001L；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样本质量，g；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol；F：稀释倍数。

注意事项：

1.如果测定吸光值A＞1.0或ΔA＞0.5，建议用提取液稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低，建议增加样本量后再进行测定。

2.试剂四有毒性，实验时请佩戴口罩手套等防护用具。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司