5×考马斯亮蓝G-250（蛋白定量用）

5×考马斯亮蓝G-250（蛋白定量用）

产品货号：R21944

产品规格：100ml/500ml

产品简介：

考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用尚宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

产品组成：

自备试剂：

PBS、BSA标准品(5mg/ml)

操作步骤：

一．微孔酶标仪法

1.完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。

4.将样品作适当稀释（多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样 品点落在标准线1/2后。

5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。

6.用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二．分光光度计法

如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。

步骤如下：

1.取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。

2.取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。

3.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4.按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来清洗比色皿)

5.反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：

此图为伯乐酶标仪680，单波长，570nm测得。室温反应三分钟

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司