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α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性检测试剂盒（可见分光光度法）
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产品货号：BA1013
产品规格：50管/24样
产品简介：
α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能一地催化α-半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。
α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。
注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
| 产品组成 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体50mL×1瓶 | 4℃ |
| 试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
| 试剂二 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
| 试剂三 | 液体80mL×1瓶 | 4℃ |
| 标准品 | 液体1mL×1支 | 4℃ |
溶液的配制：
1. 试剂一：临用每瓶加入5mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
2. 标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤（仅供参考）：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。
2. 组织的处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2. 标准液的处理：用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL。
3. 样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
| 试剂一 | 200 | - | - |
| 蒸馏水 | - | 200 | - |
| 试剂二 | 250 | 250 | - |
| 样本 | 50 | 50 | - |
| 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min | |||
| 标准液 | - | - | 500 |
| 试剂三 | 1000 | 1000 | 1000 |
| 充分混匀，室温静置2min后，400nm处测定吸光值A。ΔA=A测定管-A对照管。 | |||
三、α-GAL活性计算
1. 标准曲线的建立：
根据标准管的吸光度（y，各标准管吸光值减去浓度为零的标准管的吸光值）和浓度（x，nmol/mL）建立标 准曲线，将ΔA（y）带入标准曲线中，计算样本生成的产物量x（nmol/mL）。
2. α-GAL活性计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr
蛋白浓度需要另外测定。
（2）按样本质量计算
单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/g质量)=(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W
（3）按细菌或细胞数量计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；1000：细胞或细菌总数，1000万；T：反应时间，0.5h。
α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA1013
产品规格：50管/24样
产品简介：
α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能一地催化α-半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。
α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。
注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
| 产品组成 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体50mL×1瓶 | 4℃ |
| 试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
| 试剂二 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
| 试剂三 | 液体80mL×1瓶 | 4℃ |
| 标准品 | 液体1mL×1支 | 4℃ |
溶液的配制：
1. 试剂一：临用每瓶加入5mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
2. 标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤（仅供参考）：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。
2. 组织的处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2. 标准液的处理：用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL。
3. 样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
| 试剂一 | 200 | - | - |
| 蒸馏水 | - | 200 | - |
| 试剂二 | 250 | 250 | - |
| 样本 | 50 | 50 | - |
| 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min | |||
| 标准液 | - | - | 500 |
| 试剂三 | 1000 | 1000 | 1000 |
| 充分混匀，室温静置2min后，400nm处测定吸光值A。ΔA=A测定管-A对照管。 | |||
三、α-GAL活性计算
1. 标准曲线的建立：
根据标准管的吸光度（y，各标准管吸光值减去浓度为零的标准管的吸光值）和浓度（x，nmol/mL）建立标 准曲线，将ΔA（y）带入标准曲线中，计算样本生成的产物量x（nmol/mL）。
2. α-GAL活性计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr
蛋白浓度需要另外测定。
（2）按样本质量计算
单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/g质量)=(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W
（3）按细菌或细胞数量计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GAL活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；1000：细胞或细菌总数，1000万；T：反应时间，0.5h。
原创作者：上海尚宝生物科技有限公司
