联系我们
联系人：常婕
技术文章
组织细胞RNA提取试剂盒（Trizol提取法）
- 电话: 13******480
- 手机: 13******480
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
产品货号：11131
产品规格：50T/100T
产品简介：
RNA的种类来源比较多，提取制备的方法各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法，其中常用的是苯酚法，即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA 的完整性。加入并离心后，溶液形成上层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
组织细胞RNA提取试剂盒(Trizol提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。
产品组成：
| 试剂名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
| 试剂(A): Trizol Reagent | 50ml | 100ml | 4℃，避光 |
| 试剂(B): RNA分离液 | 10ml | 20ml | 室温，避光 |
| 试剂(C): RNA 沉淀液 | 50ml | 100ml | 室温 |
| 试剂(D): RNA 洗涤液 | 50ml | 100ml | 室温 |
| 试剂(E): RNase-free ddH2O | 10ml | 20ml | 室温 |
| 试剂(F): RNA 保存液 | 10ml | 20ml | 4℃，避光 |
自备材料：
1. 液氮、研钵或匀浆器
2. 经RNase free处理的移液器吸头、EP管等耗材
3. 低温高速离心机、低温冰箱
操作步骤 (仅供参考) ：
1. 样品准备
⑴ 贴壁细胞：①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Trizol裂解细胞，每10cm2面积加1ml，用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，以下参考悬浮细胞相关操作步骤。
⑵ 悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000g离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不，降低RNA收获率。每5×106～107，动物、植物和酵母细胞或每10细菌细胞加入1ml Trizol，充分振荡混匀。
⑶ 组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Trizol体积的10 %。研磨要迅速，以1min为佳。
⑷ 血液：取0.5～1 ml新鲜或冻存的血液，12000g离心5 min，去除血浆，加入1 ml Trizol，充分振荡混匀。
2. 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10 min后，充分振荡，反复1～3次)。将裂解样品或匀浆液室温静置5～10min，使核蛋白与核酸分离。
3. 样品分层：加入0.2 ml RNA分离液，振荡15 s，室温静置2～3min。12000 g 4℃离心10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。
4. 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染)，加入等体积RNA沉淀液混匀，室温放置15～20min。12000 g 4℃离心10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。
5. 洗涤RNA：加入1ml RNA洗涤液轻轻洗涤沉淀，室温放置5～10min，7500g 4℃离心5min，弃上清。室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。
6. 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free dd H 2 O充分溶解，-70℃保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品沉淀用RNA保存液溶解。
注意事项：
1. 样品保存：加入Trizol混匀后，样品可在-70℃放置1～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要保存，应置于超低温冰箱中保存。
2. Trizol Reagent和RNA分离液含有腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。常温运输，4℃保存。
产品货号：11131
产品规格：50T/100T
产品简介：
RNA的种类来源比较多，提取制备的方法各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法，其中常用的是苯酚法，即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA 的完整性。加入并离心后，溶液形成上层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
组织细胞RNA提取试剂盒(Trizol提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。
产品组成：
| 试剂名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
| 试剂(A): Trizol Reagent | 50ml | 100ml | 4℃，避光 |
| 试剂(B): RNA分离液 | 10ml | 20ml | 室温，避光 |
| 试剂(C): RNA 沉淀液 | 50ml | 100ml | 室温 |
| 试剂(D): RNA 洗涤液 | 50ml | 100ml | 室温 |
| 试剂(E): RNase-free ddH2O | 10ml | 20ml | 室温 |
| 试剂(F): RNA 保存液 | 10ml | 20ml | 4℃，避光 |
自备材料：
1. 液氮、研钵或匀浆器
2. 经RNase free处理的移液器吸头、EP管等耗材
3. 低温高速离心机、低温冰箱
操作步骤 (仅供参考) ：
1. 样品准备
⑴ 贴壁细胞：①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Trizol裂解细胞，每10cm2面积加1ml，用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，以下参考悬浮细胞相关操作步骤。
⑵ 悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000g离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不，降低RNA收获率。每5×106～107，动物、植物和酵母细胞或每10细菌细胞加入1ml Trizol，充分振荡混匀。
⑶ 组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Trizol体积的10 %。研磨要迅速，以1min为佳。
⑷ 血液：取0.5～1 ml新鲜或冻存的血液，12000g离心5 min，去除血浆，加入1 ml Trizol，充分振荡混匀。
2. 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10 min后，充分振荡，反复1～3次)。将裂解样品或匀浆液室温静置5～10min，使核蛋白与核酸分离。
3. 样品分层：加入0.2 ml RNA分离液，振荡15 s，室温静置2～3min。12000 g 4℃离心10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。
4. 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染)，加入等体积RNA沉淀液混匀，室温放置15～20min。12000 g 4℃离心10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。
5. 洗涤RNA：加入1ml RNA洗涤液轻轻洗涤沉淀，室温放置5～10min，7500g 4℃离心5min，弃上清。室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。
6. 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free dd H 2 O充分溶解，-70℃保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品沉淀用RNA保存液溶解。
注意事项：
1. 样品保存：加入Trizol混匀后，样品可在-70℃放置1～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要保存，应置于超低温冰箱中保存。
2. Trizol Reagent和RNA分离液含有腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。常温运输，4℃保存。
原创作者：上海尚宝生物科技有限公司
