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二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒（可见分光光度法）
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产品货号：BA1089
产品规格：50管/24样
产品简介：
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质，在500nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。
注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体60mL×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂一 | 液体0.6mL×1支 | 2-8℃ |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂三 | 液体1.5mL×1瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制：
试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用加入6mL蒸馏水溶解，4℃可保存1个月。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇、研钵/匀浆器、水浴锅。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
二、测定操作表：
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2. 操作表
| 试剂名称（mL） | 对照管 | 测定管 |
| 样本 | 0.25 | 0.25 |
| 提取液 | 0.59 | 0.59 |
| 试剂一 | 0.01 | 0.01 |
| 试剂二 | 0.1 | 0.1 |
| 试剂三 | - | 0.05 |
| 无水乙醇 | 0.05 | - |
| 混匀，37℃水浴30min后于1mL玻璃比色皿中测定500nm下吸光度，ΔA=A测定-A 对照。 | ||
三、酶活性计算公式：
1. 组织DAO活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=18×ΔA÷cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/g 鲜重）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=18×ΔA÷W
2. 血清（浆）DAO活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=18×ΔA
3. 按细胞数量计算：
单位的定义：每104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO活性（U/104cell）=ΔA÷d÷ε×V反总÷（500×V样÷V提取）÷T= 0.036×ΔA
V反总：反应总体积，1mL；V样本：加入样本的体积，0.25mL；V提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：1mL玻璃比色皿光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反应时间，30min；500：细胞总数，500万。
注意事项：
1. 如果ΔA小于0.01，适当加大提取用样本质量；ΔA大于0.8，样本可用提取液适当稀释，或者减少提取用样本质量。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定。
产品货号：BA1089
产品规格：50管/24样
产品简介：
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质，在500nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。
注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体60mL×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂一 | 液体0.6mL×1支 | 2-8℃ |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂三 | 液体1.5mL×1瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制：
试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用加入6mL蒸馏水溶解，4℃可保存1个月。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇、研钵/匀浆器、水浴锅。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
二、测定操作表：
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2. 操作表
| 试剂名称（mL） | 对照管 | 测定管 |
| 样本 | 0.25 | 0.25 |
| 提取液 | 0.59 | 0.59 |
| 试剂一 | 0.01 | 0.01 |
| 试剂二 | 0.1 | 0.1 |
| 试剂三 | - | 0.05 |
| 无水乙醇 | 0.05 | - |
| 混匀，37℃水浴30min后于1mL玻璃比色皿中测定500nm下吸光度，ΔA=A测定-A 对照。 | ||
三、酶活性计算公式：
1. 组织DAO活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=18×ΔA÷cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/g 鲜重）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=18×ΔA÷W
2. 血清（浆）DAO活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=18×ΔA
3. 按细胞数量计算：
单位的定义：每104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO活性（U/104cell）=ΔA÷d÷ε×V反总÷（500×V样÷V提取）÷T= 0.036×ΔA
V反总：反应总体积，1mL；V样本：加入样本的体积，0.25mL；V提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：1mL玻璃比色皿光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反应时间，30min；500：细胞总数，500万。
注意事项：
1. 如果ΔA小于0.01，适当加大提取用样本质量；ΔA大于0.8，样本可用提取液适当稀释，或者减少提取用样本质量。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定。
原创作者：上海尚宝生物科技有限公司
