单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1078

产品规格：100管/96样

产品简介：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、 豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纤维化的程度。此外，MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病症。

MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。

产品内容：

提取液一：液体100ml×1瓶，4℃保存。

提取液二：液体100ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体60ml×2瓶，4℃保存。

试剂二：液体2ml×1管，4℃避光保存。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液一）进行冰浴匀浆，10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。取上清置于冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加1mL提取液一），冰浴超声破碎细胞（功率300W，超声3，间隔7，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。取上清置于冰上待测。

3、血清：直接测定。

二、测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至360nm。

2、操作表

注意：空白管只需测定一次。

三、MAO活性的计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按蛋白含量计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 114×△A÷Cpr

2、按样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ g）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 114×△A÷W

3、按细胞数量计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每10⁴个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 114×△A÷细胞数量

4、按照液体体积计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ L）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷V样= 114000×△A

ε：底物摩尔消光系数，1460L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。

b.用96孔板测定的计算公式如下：

1、按蛋白含量计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 228×△A÷Cpr

2、按样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ g）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 228×△A÷W

3、按细胞数量计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每10⁴个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 228×△A÷细胞数量

4、按照液体体积计算

酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U/ L）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷V样= 228000×△A

ε：底物摩尔消光系数，1460L/ mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。

注意事项：

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2. 样品蛋白质含量需要另外测定。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司