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总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒

总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒

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更新日期:2026/8/24 23:31:58

生 产 地:中国大陆

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简单介绍:总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒

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详细内容

总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒说明书

分光光度50管/48样

注 意:正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理:

在酸性环境下,物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。

自备实验用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,使用预冷。

试剂一:液体50mL×1瓶,避光保存。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体5mL×1瓶,避光保存。

样品的制备:

(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品

血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过30 d)后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎(功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次);10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

操作步骤:

混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1的比例混合,使用预温至37℃。

空白管

测定管

混合液(μL)

900

900

样品(μL)

30

双蒸水(μL)

120

90

充分混匀,反应20min,双蒸水调零,1mL玻璃比色皿,测定593nm处吸光值,△A= A测定-A空白

注意:空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算:

1.定义:样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(△A)所需的标准液离子浓度表示。

标准曲线:y=0.8442x-0.0048,R2=0.9979

2.计算公式:

(1)按蛋白浓度计算

单位定义:每mg蛋白每分钟产生1μmolFe2+-TPTZ定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力(U/mg prot)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V样÷(V样×Cpr)÷T

=59.228×(△A+0.0048)÷Cpr

(2) 按样品质量计算

单位定义:每g样本每分钟产生1μmolFe2+-TPTZ定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力(U/g 鲜重)=(△A+0.0048)÷ 0.8442×1000×V样÷(V样÷V样总×W)÷T

=59.228×(△A+0.0048)÷W

(3) 按细胞数量计算

单位定义:每万个细胞每分钟产生1μmolFe2+-TPTZ定义为一个酶活力单位。、

总抗氧化能力(U/104cell)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V样÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))÷T
=59.228×(△A+0.0048)÷ 细胞数量(万个)

(4)按液体体积计算

单位定义:每毫升样本每分钟产生1μmolFe2+-TPTZ定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力(U/mL)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000÷T

= 59.228×(△A+0.0048)

V样总:加入提取液体积,1 mL; V样:反应中样品体积,0.03mL;T:反应时间,20min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1. 试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

总抗氧化能力(Total,antioxidant,capacity,T-AOC)试剂盒

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