小鼠 IgG2a抗体亚型（ IgG2a）酶联免疫分析试剂盒使用说明

本试剂盒仅供研究使用。

96T

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中 IgG2a 抗体亚型（ IgG2a）表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠 IgG2a抗体亚型（ IgG2a）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中 IgG2a 抗体亚型（ IgG2a）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中小鼠 IgG2a抗体亚型（ IgG2a）的存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为小鼠 IgG2a抗体亚型（ IgG2a）阴性

阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为小鼠 IgG2a抗体亚型（ IgG2a）阳性

。