乳腺癌并非单一疾病。根据细胞表面三个关键蛋白的表达情况，乳腺癌被分为不同类型：雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER2）。如果这三种受体都是阴性，就是“三阴性乳腺癌”，约占全部乳腺癌的15%左右。

三阴性乳腺癌患者体内缺乏这些蛋白，意味着这类患者：

这种癌症多见于年轻女性，侵袭性强、复发快、生存率低。据统计，转移性三阴性乳腺癌的5年生存率仅约12%，中位总生存期不足6个月。因此，三阴性乳腺癌是预后最差的乳腺癌亚型。

近年来，肿瘤免疫治疗飞速发展，其中最广为人知的是免疫检查点抑制剂（如PD-1/PD-L1抗体）和CAR-T细胞疗法。然而，CAR-T疗法虽然在血液肿瘤中效果显著，在实体瘤中效果不佳。

TCR-T细胞疗法是CAR-T的“近亲”，两者都属于过继性细胞免疫治疗：从患者体内提取T细胞，通过基因工程给T细胞装上能够识别肿瘤的“导航装置”，在体外扩增后回输到患者体内，使其可以精准杀伤肿瘤。

两者的区别在于识别方式不同：

由于绝大多数肿瘤特异性抗原位于细胞内部而非表面，TCR-T理论上具有更广阔的靶点选择空间，研究人员通过基因编辑技术，将能特异性识别肿瘤抗原的TCR基因导入T细胞内，使其获得识别和杀伤肿瘤的能力。

本研究中，科学家们采用了一套系统的靶点发现策略，结合生物信息学分析、qRT-PCR和免疫组化染色，对大量三阴性乳腺癌（TNBC）组织及健康组织进行筛选，最终鉴定出Ropporin-1（ROPN1）可作为T细胞治疗TNBC的潜在靶点。ROPN1原本是与精子发生相关的蛋白，在正常生理条件下主要表达于睾丸。研究发现，ROPN1在超过90%的TNBC原发灶和转移灶中呈均一高表达，而在健康组织中几乎不表达。这一发现意义重大：意味着一个单一的TCR-T细胞产品理论上可覆盖90%以上的TNBC患者。

进一步，研究人员通过免疫肽组学技术在癌细胞系和组织中鉴定出11个HLA-A2结合的ROPN1抗原肽，其中9个能够从健康供体的初始T细胞库中富集抗原特异性T细胞，并最终获得超过25个克隆型TCR。研究团队采用“从头筛选”策略，经过多轮筛选锁定了高特异性TCR，其识别的抗原肽序列为FLYTYIAKV（简称FLY-A）。

该TCR在多个维度表现优异：

本研究使用Molecular Devices公司的ImageXpress Micro高内涵成像分析系统进行病人来源类器官（PDOs）的拍摄，筛选及分析。其中包括对TNBC PDOs进行长时间荧光成像（DAPI/FITC/TRITC），并统计不同时间点的荧光强度值，对比不同类型的T细胞对TNBC生长的影响。同时，利用明场成像拍摄TNBC PDOs动力学图像，并统计和分析明场类器官细胞大小和数量。结合荧光+明场成像与自动化图像分析，高内涵能够在保持类器官三维结构完整性的同时，高效统计类器官的大小和数量变化，显著提升药物或细胞治疗评价的通量与数据可靠性。

本研究针对三阴性乳腺癌（TNBC）发现的新型T细胞治疗靶点ROPN1及相应TCR-T疗法（PCT1:CO-STIM），在临床前评价中引入了Molecular Devices公司的ImageXpress Micro高内涵成像分析系统，对病人来源类器官（PDOs）进行高通量、多维度的功能验证。利用该系统，研究团队对TNBC PDOs进行了长时间荧光成像（DAPI/FITC/TRITC），动态统计不同时间点的荧光强度，从而定量比较不同类型T细胞对肿瘤生长的抑制作用；同时结合明场成像连续记录类器官的动力学变化，自动分析其大小与数量。

高内涵系统的核心优势在于：

相较传统终点检测方法，高内涵成像这种“荧光+明场”双模态、结合自动化图像分析的策略，能够在不破坏样本的情况下，实现连续、多参数、自动化定量分析，显著提高药物或细胞治疗评价的通量和数据可靠性，避免传统终点法破坏样本及主观计数带来的偏差，这对于评估细胞治疗在复杂三维模型中的真实效应具有不可替代的价值。通过高内涵成像分析系统可以对ROPN1靶向TCR-T疗法在类器官层面的全面评估，为后续临床试验申请（CTA）提供了扎实的体外效力与安全性数据支撑，加速该创新疗法向临床转化。