食用油中苯并（a）芘测定解决方案

1.背景

苯并（a）芘（benzo（a）pyrene，BaP），又名3,4-苯并芘，结构式如下图1所示，属于多环芳烃中的一种。苯并（a）芘是国际公认的强致癌物，被世卫组织定为1类致癌物。

将实施的《GB 2762-2022 食品安全国家标准 食品中污染物限量》标准中规定，食用油中苯并（a）芘限量为10 µg/kg。 本实验参考《GB 5009.27-2016食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》，采用青岛盛瀚的高.效液相色谱L-3000系列，对食用油中苯并（a）芘的液相色谱测定法进行方法验证。

2. 仪器和设备

表1 食品中苯并（a）芘的检测所需液相色谱仪器配置

图2 盛瀚L-3000液相色谱仪

表2 食品中苯并（a）芘的检测所需处理设备

3. 实验方法

3.1试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为优纯。

乙腈、甲醇、正己烷：色谱纯。

水：超纯水（18.2 MΩ•cm）。

净化柱：中性氧化铝柱22g/60mL

3.2标准溶液

苯并（a）芘标准储备液（100 mg/L）：自购100 mg/L苯并（a）芘乙腈标准溶液。

苯并（a）芘标准中间液（1.0 mg/L）：吸取0.1 mL苯并（a）芘标准储备液（100 mg/L）于10 mL容量瓶，乙腈定容混匀备用。

苯并（a）芘标准工作液：把苯并（a）芘标准中间液（1.0 mg/L）用乙腈稀释得到0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL标准曲线，现用现配。

3.3样品的制备

提取：称取0.4 g（A：0.4032 g，B：0.4014 g），加入5 mL正己烷，涡旋30 s，待过柱。

净化：中性氧化铝柱用30 mL正己烷活化，弃去不要。然后加入提取液，并用茄形瓶收集，再用50 mL正己烷洗脱，继续收集净化液。

浓缩：将净化液40℃旋蒸至1-2 mL，转移至离心管，用正己烷洗涤茄形瓶2次，洗涤液同样转移至离心管，40℃氮吹近干，0.4 mL乙腈涡旋复溶，过0.45 μm滤膜，上机检测。

4. 色谱条件

流动相：水：乙腈=12：88；

流速：1.0 mL/min；

色谱柱：Shinesil-C18 4.6×250，5μm；

柱温：35℃；

检测波长：激发波长384 nm，发射波长406 nm；

进样量：20 μL。

5. 实验结果

5.1典型谱图

图3 1.0 ng/mL苯并（a）芘标准溶液

5.2校准曲线

0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL的苯并（a）芘标准工作液线性方程：Y=216.17653X-5.92576。相关因子：R=0.9999934。

图4 苯并（a）芘标准曲线

5.3重复性测试

苯并（a）芘标准溶液（1 ng/mL）系统适应性测试（SST）结果如下图，保留时间RSD=0.08%，峰面积RSD=0.95%。

图5 苯并（a）芘标准溶液（1 ng/mL）系统适应性测试（SST）结果

5.4实际样品测定

花生油样品苯并（a）芘测试色谱图及上机检测结果如下所示。

表3 食品中苯并芘的检测所需处理设备

图6 实际样品苯并（a）芘测试谱图

平行样品的绝对差值为0.022 μg/kg，与平行样品算数平均值的比值为2.74%，小于20%，符合《GB 5009.27-2016食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定》的要求。

6. 结论

上述实验结果表明，采用盛瀚L-3000高.效液相色谱仪，苯并（a）芘标准溶液浓度范围在0.5 ng/mL~20.0 ng/mL内，具有很好的线性，线性相关系数为0.9999934，定性定量重复性良好，可满足《GB 5009.27-2016食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定》要求。