小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒

名称: 小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒

英文名称:human IgM(RhV-IgM)ELISA kit

规格: 96T/48T

品牌:酶科

种属:大鼠ELISA试剂盒

检测波长:450 nm

所需样本体积: 50-100ul

适用范围:仅供科研

保存及有效期:2-8℃，六个月

检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

上海琛艺供应的种属有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等

1.试剂盒用途

本试剂盒用于体外定量检测待测样品中重组胰蛋白酶含量。本试剂盒仅供研究和工业生产使用。

2.试剂盒基本参数

灵敏度：≤ 1 ng/ml

检测范围：0.078 - 40 ng/ml

特异性：可检测重组胰蛋白酶，与其它重组大肠菌表达系统相关蛋白无明显交叉反应。

重复性：板内，板间变异系数均 < 10%。

工作时间：熟练实验人员可在 2.5 小时内完成一次测定。

有效期：6 个月

小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒

3.试剂盒组成及保存

未拆封的试剂盒可在 2-8℃保存一周。如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

4.洗板方法

①自动洗板机：每孔加入洗涤液 350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整），注入和吸出间

隔 60 秒。②手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干，每孔加入洗涤液 350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整），浸泡 2-3 分钟，甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸上拍干。

5.操作步骤

①将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔（复孔），每孔

100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔 100 μL，若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后加样。将酶标板覆膜并置于 37℃孵育 60 分钟。

提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动酶标板混匀避免产生气泡。

加样时间控制在 10 分钟内。

②洗涤：甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干。每孔加入 350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整）洗涤液，浸泡 2-3 分钟，甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干。重复此洗板步骤 3 次。

③每孔加入 HRP-抗体工作液 100 μL，轻轻晃动酶标板混匀避免产生气泡，将酶标板覆膜并置于 37℃孵育 30 分钟。

④洗涤：用洗涤液洗板 4 次，方法同步骤 2。

提示：酶标板洗涤不完全可能会造成标准曲线梯度差，或背景值高。应注意加入洗涤液的体

积，以加满酶标板的孔为标准进行调整，确保所有的孔浸泡在洗涤液中并浸泡 2-3 分钟。⑤显色：每孔加显色底物（TMB）工作液 100 μL，酶标板覆膜置于 37℃ 孵育 10 分钟。

提示: 加显色底物推荐使用排枪和加样槽，但应严格避免底物污染，确保所使用的加样槽洁净或一次性使用，加液时移液枪的枪头切不要接触孔内溶液以避免污染，影响实验结果。可通过观察加样槽中底物是否变蓝预判底物是否被污染。根据实际显色情况酌情缩短或延长，显色时间在 5-30 分钟范围内。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。

⑥终止：每孔加终止液 50 μL，终止反应，室温放置 1 分钟。推荐使用排枪和加样槽。

提示: 终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。加液时移液枪的枪头切不要接触孔内溶液以避免污染，影响实验结果。

⑦读数：用酶标仪在 450 nm 波长（参考波长 650nm）测量各孔的光密度（OD450/650 nm 值）。

提示: 请提前 15 分钟打开酶标仪电源，预热仪器，设置检测程序。

6.结果判断

①计算每组复孔的平均 OD 值。每个标准品的平均 OD 值减去空白孔的 OD 值作为矫正值。以标准品的浓度为横坐标（X），OD 值为纵坐标（Y），绘出标准曲线（作图时亦可去掉空白组的值）。

②推荐使用专业的曲线制作软件，如 curve expert 1.3 或 ELISA Calc（请使用 Logistic 五参数拟合曲线计算方法绘制标准曲线）等。

③若样品 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测。

④典型数据

由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的 OD 值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考实验者需根据自己的实验建立标准曲线。