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小鼠肥大细胞类胰蛋白酶 -1 ( MCT-1 )ELISA 检测试剂盒说明书
点击次数：447 发布时间：2018/12/26 14:23:14
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王*
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检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肥大细胞类胰蛋
白酶-1（MCT-1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温
育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转
化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肥大细胞类胰蛋白酶-1（MCT-1）呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000
转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，
在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这
属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5
倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
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4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 6 96 孔配置 8 48 孔配置 备注
微孔酶标板 12 孔×8 条 12 孔×4 条 无
标准品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48 ng/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍
干，如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100
μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，
如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
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绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出
标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于 1.0 ng/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验
者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
说明
由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分 析，
本产品可能存在一定的质量技术风险。
1. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请
务必准备充足的标本备份。
2. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据 试
剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。
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3. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有
严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
4. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使
用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
5. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致
ELISA 实验结果偏差。
6. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时 间
等，所以可能存在检测不出的情况。
7. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测
抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
原创作者：北京冬歌博业生物科技有限公司
