食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒产品说明书

食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜组织（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

产品内容

清理液（Reagent A） 毫升

缓冲液（Reagent B） 毫升

染色液A（Reagent C1） 瓶

染色液B（Reagent C2） 毫升

标准液（Reagent D） 微升

产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效期；6月

用户自备

50毫升烧杯：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、 样品准备

1、固态食品处理

1． 秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封

2． 加入xx毫升清理液（Reagent A）

3． 搅拌30分钟，充分混匀

4． 继续加入清理液（Reagent A）到终容量为10毫升

5． 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒

6． 封口膜封口备用

2、液态食品处理

1． 移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管

2． 放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g

3． 移取上清液到新的15毫升锥形离心管

4． （选择步骤）可以加入适量的清理液（Reagent A）

5． （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）

6． 置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存

三、 样品测读

实验开始，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取xx毫升染色液B（Reagent C2）到xx瓶染色液A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。

1． 准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔

2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent B）到96孔板里的每个孔里

3． 分别加入xx微升染色工作液

4． 加入xx微升缓冲液（Reagent B）到空白对照孔

5． 加入xx微升上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里

6． 加入20微升裂解样品（100微克食品总量）到样品孔里

7． 轻轻摇动96孔板，使其混匀

8． 室温下孵育15分钟

9． 即刻放进酶标仪里测读：515nm波长

10． 分析结果：

1） 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）

2） 空白对照孔为大吸光单位（OD515nm）读数

3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD515nm）读数

4） 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）

5） 计算样品实际总抗氧化能力

6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）

7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升）

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司