联系我们
联系人：陶经理
技术文章
鱼瘦素（LEP）ELISA试剂盒的实验原理以及操作步骤你知道多少？
点击次数：293 发布时间：2019/9/11 15:16:52
商家名片
陶**
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 17******356
- 手机: 17******356
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
鱼瘦素（LEP）ELISA试剂盒的实验原理以及操作步骤你知道多少？
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鱼瘦素（LEP）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鱼瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
原创作者：上海臻科生物科技有限公司
