人睾酮（T）ELISA检测试剂盒详细说明书(CRO企业定制)

【产品名称】通用名称：人睾酮（T）定量检测试剂盒（ELISA）

英文名称：Human Testoterone（T）ELISA KIT

【包装规格】96人份/盒

【预期用途】

【检验原理】

采用酶联免疫竞争法检测血清中睾酮含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制成固相二抗，然后加入待测血清、辣根过氧化物酶标记睾酮以及抗睾酮抗体，使之形成包被二抗-抗睾酮抗体-睾酮（HRP）复合物，标记睾酮的结合量与血清中的睾酮量成反比。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值)，通过计算机或作图拟合浓度－吸光度曲线，反算出待测血清中睾酮含量。

【主要组成成分】

校准品浓度依次为：20、5、1.6、0.4、0.1、0 ng/mL校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

1.将各种试剂移至室温平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1：20稀释，混匀后备用。

2. 将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品依次各设两孔，每孔加入相应校准品50μl；其余每个检测孔直接加待测血清50μl。

3. 每孔加入酶标抗原50μl（空白对照孔除外），再按同样的顺序每孔加入抗体50μl，充分混匀，贴上封板膜，置37℃温育1小时。

4. 手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。

5. 每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。

用酶标仪读数，单波长酶标仪需先用空白对照孔调零点，然后测定各孔吸光值。

【实验结果计算】

1. 双波长酶标仪可以不设空白对照孔，也无需调零点。单波长酶标仪必须设空白对照孔，先用空白对照孔调零，然后测量。如没有调零，则各孔吸光值均需减去空白对照孔的吸光值。

2.计算百分结合率：用校准品或样品的OD值除以S0的OD值，为百分结合率。

3. 手工作图：用百分结合率对数（logit-ln）坐标纸，以校准品浓度为横轴，以对应的百分结合率为纵轴，画出平滑直线，在曲线上按照待测血清百结合率找到的浓度值。

4.计算机：由电脑计算出其浓度。

【产品性能指标】

1. 外观和物理检查：液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；所有组分应无包装破损。各组分装量应符合要求。

2.准确性：在样本中添加高、中、低三个浓度的睾酮制成样品，以试剂盒校准品进行分析测定，用百分结合率对数（logit-ln）拟合，要求回收率在85.0%～115.0%之间。

3.线性：用Logit-ln数学模型拟合，在0.1～8.1ng/ml范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于0.9900。

4.精密度：批内精密度（CV%）应不高于15.0%；批间精密度（CV%）应不高于15.0%。

5.最低检出限：试剂盒最低检出限应不大于0.1ng/ml。

6. 特异性：与孕酮（P）、双氢睾酮（DHT）、雌二醇（E2）没有显著交叉反应。配制高浓度P 、DHT、E2的溶液，测量结果应符合下表。

7、稳定性:2℃-8℃保存，有效期6个月。

8、检测范围:0.1-20ng/mL

【参考区间】

成年男性 2.5-14.6ng/ml，均值：5.28ng/ml

成年女性 0.1-2.3ng/ml ，均值：0.93ng/ml

通过测定200份健康人血清，经统计学处理（正态分布，取95%置信区间）确定参考区间。由于人的个体差异及地域、年龄和性别的不同，所确定的参考区间存在一定差异，因此本说明书所提供的参考区间仅作参考，各实验室应根据各自地区的正常人群建立自己的参考区间。